Tincion de gramm

PRACTICA: TINCION DE GRAM

OBJETIVO:
1. Clasificar algunas especies bacterianas en Gram positivas o Gram negativas
de acuerdo a la tinción de Gram.
2. Comprender la importancia que tienenestas tinciones para la caracterización
e identificación de las bacterias.
INTRODUCCION:
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para lavisualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a lamorfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradoy Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas)a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúande mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con elcristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no sedecoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, comola safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial...