tincion de microorganismps

Practica de laboratorio: Tinciones Microbianas
I. Introducción:
En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeños para observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.
Estos microorganismos difieren en características tales como forma de nutrición, estructura, tamaño, composición entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscópico elfacilita notablemente la observación; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales facilitan también la observación de ciertas estructuras celulares.

Tipos de Tinción:
Tinción Simple: utiliza un solo colorante.
Tinción de Gram: Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)
Tinción Ácido Resistente:Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.
Tinción de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observarmaterias núcleos de las células.
Tinción de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.
Tinción de Cápsula: Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados creando resistencias.
Tinción de Flagelos: Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.

II. Objetivos:
Estudiar la presencia de microorganismos en diferentes nichos ecológicos,familiarizarse con el manejo del microscopio para la visualización de microorganismos.
III. Materiales:
Medios de cultivos con colonias microbianas
alcohol acetona
lugol
fucsina o safranina
cristal violeta

IV. Procedimiento:
1. Se calienta el asa al rojo vivo
2. Se coge una pequeña muestra de una colonia.
3. Se pone esa muestra en la lamina y se estira.
4. Se fija en el mechero, perono muy cerca para que las bacterias no se quemen.
5. Se agrega una gota de cristal violeta, limpiamos excesos con agua destilada. Seguir este procedimiento para cada colorante, siguiendo este orden cristal violeta, lugol, alcohol acetona y fucsina o safranina.
6. Dejamos escurrir, secar y observamos por el microscopio.

Observaciones
Las bacterias Gram positivas, fijan el colorantecristal violeta (colorante primario), que al unirse al lugol (mordiente), forman un complejo insoluble en agua, debido a que las bacterias GP, poseen en su pared celular, RNA en forma de ribonucleato de magnesio. Este complejo imposibilita que el colorante cristal sea barrido por el alcohol acetona, quedando teñida de color morado.
Las bacterias Gram negativas, no poseen este compuesto en su paredcelular, por lo tanto no forman el complejo insoluble, se tiñen con el último colorante (fucsina básica) que es de color rosado.


V. Cuestionario:
Características generales del grupo de bacterias Gram-positivas fermentadoras y formadoras de esporas. De ejemplos.
Bacterias del suelo
bacilar en todas las especies menos Sporosarcina.
Quimioorganotrofas
Gram-positivas que pueden aparecer comoGram-negativa en la fase estacionaria.
Respiración aerobia, anaerobia o fermentación
Pueden ser móviles por flagelos peritricos
Productoras de formas de resistencia (endosporas) que desarrollan criptobiosis.
Generalmente termorresistentes en forma de endosporas, algunas especies son termófilas (B. stearotermophilus,Thermoactinomyces spp.)
Pueden aislarse del suelo mediante tratamiento de lasmuestras a 80ºC durante un tiempo para destruir todas las otras células vegetativas.
Ejemplos:
Bacilos Gram positivos formadores de esporas son las especies Bacillus y Clostridium. Estos bacilos forman esporas que pueden vivir varios años.
Genero Bacillus Son bacilos Gram positivos, aerobios, grandes, se agrupan formando cadenas; las esporas se encuentran dentro de estos bacilos. La mayoría...