Tincion gram

1. TITULO: Tinción Gram y observación de bacterias

2. INTRODUCCIÓN:

“A causa del tamaño imperceptible de las bacterias por la falta de contraste que hay entre estos organismos usualmente transparentes y el medio que les rodea, existe gran dificultad para observarlos con el microscopio óptico, en su estado natural; esto hizo que se crearan métodos para poder apreciar mejor a losmicroorganismos, y poder distinguir muchas características estructurales que no son fáciles de apreciar; siendo la utilización de colorantes el medio más simple de aumentar el contraste.

La tinción de Gram es una técnica de coloración de contraste o diferencial, que se desarrolló en 1844 y se utiliza en microbiología para la observación de bacterias, las cuales, con base en la reacción que tengan lasparedes de los microorganísmos a los colorantes usados con esta técnica, se les califica en grampositivos y gramnegativos; considerándose bacterias Gram positivas a las bacterias que se aprecian en color violeta y en color rosa bacterias a las Gram negativas, otra ventaja es que se puede efectuar una percepción primordial a las diferencias entre bacterias, por su morfología (Cocos Bacilos y Espirilos).” (1)

“Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célulagram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, ylipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano.” (2)

3. MATERIALES Y MÉTODOS:

 Cultivo de charco de agua en agar nutriente
 Portaobjetos
 Mechero
 Palillos
 Aceite de inmersión
 Microscopio
 Set de tinción Gram:
 Cristal Violeta
 Yodo
 Decolorante (alcohol + acetona)
 Safranina
Para poder observar bacterias mediante tinción gram fuenecesario seguir el siguiente procedimiento:

• Se preparó un frotis del cultivo:
 Tomando el palillo y cogiendo un poco de muestra. Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra, se frotó en el portaobjetos para depositarla.
 Se pasó el portaobjetos por la llama del mechero para fijar la muestra.0
• Una vez obtenido el frotis con la muestra, se procedió a teñir la misma con violetacristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se dejó actuar al colorante por 1 minuto.
• Al transcurrir el minuto, se enjuagó la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Luego de lo cual se colocó el yodo y se lo dejó actuar por 1 minuto.
• Se lavó nuevamente la muestra y se aplicó lasolución decolorante gota a gota, hasta que ya no escurrió más líquido azul; hasta que salió transparente. Se lo dejó el tiempo necesario.
• Se lavó el portaobjetos y se cubrió con safranina por 1 minuto. Luego de lo cual se lavó nuevamente y se dejó secar al ambiente.
• Se observó al microscopio al lente de 100x con aceite de inmersión.

4. RESULTADO:

Se observaron dos tipos de bacterias:Cocos: forma redonda Bacilos: forma alargada, bastón
Staphylococos: distribución en racimos
Gram Positivos: color morado Gram Negativos: color rojo

Las cuales se clasificaron en gram positivo y gram negativo en base al color que adoptaron, como se denota en las características de cada una.

5. DISCUSIÓN:

Los cocos se colorearon de morado ya que retuvieron la mezcla de yodo y...