Tincion gram

OBSERVACIÓN DE BACTERIAS Y LA TINCIÓN GRAM(tinción diferencial)

1. OBJETIVOS:
a. Reconocimiento de bacterias gram positivas y gran negativas mediante la técnica de coloración diferencial.
b. Conocer el fundamento estructural de la tinción gram.

1. FUNDAMENTO TEÓRICO:
La tinción de Gram es uno de los métodos de mayor importancia y relevancia que se emplean en ellaboratorio de Microbiología. Esta tinción constituye un tipo de tinción diferencial puesto que clasifica las bacterias en dos grandes grupos: gran positivas y gran negativas en virtud a la coloración que éstas desarrolle y la coloración dependerá de la diferencia constitutiva en la estructura de la pared celular de las bacterias.
El verdadero valor de la tinción Gram radica en el hecho que seemplea en diversas áreas, para múltiples propósitos y es un procedimiento utilizado por todos los laboratorios.
Las aplicaciones de la tinción de Gram cubre diversos campos que van desde los aspectos clínicos en los hospitales hasta consideraciones médicos legal para los casos de abuso sexual.
El danés Christian Gram en el año 1884 dejó una huella indeleble para la humanidad, al emplear y etudiaresta tinción que a la fecha no ha perdido notoriedad, ni efectividad y sigue siendo la piedra angular de la microbiología.
FUNDAMENTOS DE LA TINCIÓN:
Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglucano, además de dosclases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara
interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el
ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado
solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína)
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada,
y se encuentra unida a una segunda membranaplasmática exterior (de
composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa
delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La
membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es elpeptidoglicano, ya que esel material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que
la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos,
como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano queposee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal
violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa,
perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram
positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción
de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino
que este actúadeshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda
escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-
violácea.
ACERCA DE LOS REACTIVOS A UTILIZAR EN LA EXPERIENCIA:
* Un primer colorante básico: Cristal violeta que se aplica sobre la muestra y reacciona con las bacterias(cargadas negativamente) coloreándolas.
* Un mordiente: Lugol, que incrementala afinidad entre el primer colorante y las bacterias. El mordiente se combina con el colorante para formar un compuesto insoluble coloreado en el interior de la bacteria.
* Un agente decolorante: como el etanol de 95% o la mezcla de alcohol-acetona(1,1) que son disolventes orgánicos cpaces de eliminar el primer colorante de algunas bacterias, decolorándolas.
* Un colorante contraste:...