tincion Gram

Tinción de Gram.
Introducción.
Uno de los métodos de tinción más utilizados en microbiología es el de Gram según él, las bacterias se dividen en dos grandes clases: Gram positivas y Gramnegativas.
Las primeras se caracterizan por fijas el colorante primario (cristal violeta). Los organismos Gram negativos pierden el colorante primario al decolorarse con alcohol o con solución alcohol acetonay se tiñe con el colorante rosa secundario (carbol fucsina o safranina).
El mecanismo de esta coloración es como sigue, el colorante básico entra al microorganismo donde forma con el yodo una lacainsoluble en agua. El alcohol al 95% empleado para aclarar, deshidrata las paredes de los microorganismo Gram positivos tratados con mordiente (yodo) y forman una barrera que la laca no puede atravesar. En las células Gram negativas, se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo cristal violeta yodo.
La pared celular juega un papel muy importante en esta coloración, yaque si esta sufre algún daño por una u otra causa; el microorganismo Gram positivo se vuelve Gram negativo, dando resultados falsos.
Objetivo.
Aplicar la técnica de la tinción de Gram conmicroorganismos del cepario del laboratorio y clasificarlos como Gram positivos y Gram negativos.



Material.
Microscopio
Portaobjetos
Asas bacteriológicas
Pipetas
Charolas de tinción
Mechero debunsen
Aceite de inmersión.
Reactivos.
Equipo para tinción de Gram.
Cultivos: varios.
Procedimiento.
La técnica de tinción se efectúa de la siguiente manera:
1 Se preparan frotis de las diferentescepas, se dejan secar sobre la mesa y se fijan a la flama.
2 Se cubren durante 1 minutos con la solución cristal violeta.
3 Se escurre el colorante y se lava el frotis con agua corriente odestilada.
4 Se cubre, durante 1 minutos los frotis con la solución de lugol.
5 Se escurre el lugol y se lava con agua corriente o destilada.
6 Se decolora con alcohol etílico del 96% procurando que salga...