Tincion

Introducción
La tinción de Gram es uno de los métodos más utilizados cuando tiene que determinarse al microscopio la filogenia de un microorganismo, Fue una de las primeras pruebas para intentar identificar un patógeno. Fue creada en 1884 por el bacteriólogo danés Christian Gram.
El proceso original fue mejorado por Hucker en 1921, el cual hallo la manera de que los reactivos fueranmás estables y mejorando la calidad del proceso y resultado.
Existe otro metodo de Gram con algunas modificaciones diseñado por Kopeloff en 1923, que permitía teñir mejor a las bacterias de difícil tinción como las anaerobias.
Hasta 1974 Gregersen estableció las diferencias entre bacterias Gram+ y Gram- debidas a la diferente composición de la pared celular.(http://biologia.laguia2000.com/histologia/tincion-gram#ixzz34TrtMVtd)
Se comprende como bacterias Gram positivas al grupo de bacterias que no contienen una membrana externa la cual protege el citoplasma bacteriano, poseen una capa gruesa de peptidoglicano que rodea una membrana citoplásmica que consta de varias capas y que presentan ácidos teicoicos en la superficie.
Entre otras cosas, se diferencian por teñirse de azul oscuro ovioleta.
Las bacterias Gram positivas constituyen uno de los principales grupos de bacterias, cuando son consideradas taxón (grupo de organismos emparentados, que en una clasificación dada han sido agrupados), además se emplea el nombre de pos bacteria.
De modo que todas las bacterias restantes son consideradas Gram negativas; Las cuales presentan una mayor resistencia a los medicamentos.(http://curiosidades.batanga.com/2010/10/23/las-bacterias-gram-positivas).
No obstante, as Archaea también responden a la tinción GRAM, Sin embargo las especies pertenecientes al reino bacteria son las que se dividen tradicionalmente entre las GRAM+ (GRAM positivas) que son aquellas bacterias que se tiñen con este procedimiento y las GRAM- (GRAMnegativas) que no retienen el tinte. (http://biologia.laguia2000.com/histologia/tincion-gram#ixzz34TaIvGmQ)


La mayoría de las células bacterianas tienen un tamaño muy pequeño, de manera que es difícil verlas e identificarlas aun con ayuda de un microscopio óptico.
La causa principal es debido a la falta de contraste entre la célula y el medio que lo rodea, el método más sencillo es aumentar elconstataste por medio de colorantes. Suele aplicarse para observar los diferentes tipos de células o para descubrir diferentes estructuras como flagelos, esporas, paredes celulares, etc.
Las células son normalmente tratadas para solidificar o condensar el protoplasma antes de teñirlas, procedimiento también llamado fijación.
La fijación por medio de calor es lo más común, sin embargo tambiénpuede fijarse con sustancias o reactivos químicos como formaldehido, ácidos y alcoholes.
Posteriormente de la fijación, se agrega colorante. La fijación se produce normalmente en células que han sido fijadas previamente sobre un portaobjetos.
La fijación disminuye y contrae el tamaño de la célula; contrariamente la tinción provoca que las células parezcan más grandes de lo que son en realidad,de modo que las dimensiones de las células que han sido fijadas o teñidas no pueden calcularse con precisión.
La mayor parte de los colorantes son derivados o compuestos orgánicos tienen una similitud específica por los materiales celulares.
Existen muchos colorantes son moléculas cargadas positivamente (cationes), que se combinan intensamente con constituyentes celulares con carga negativa,como los ácidos nucleídos y polisacáridos ácidos. (http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm)
Algunos ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta, y la safranina.
Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, como son muchas proteínas. Algunos colorantes...