Tinciones

Estudio microscópico de los microorganismos

PREPARACIONES MICROBIOLÓGICAS A. En fresco fijas B. Fijas y teñidas a) Tinción simple b) Tinciones diferenciales c) Tinciones selectivas
2 Marzo de 2009.

OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS

MICROORGANISMO
 Organismo

que no pueden verse a simple vista, usar algún microscopio.

 Viven

como células aisladas o en entidades que contienenácidos nucleicos capaz de replicarse
algas, hongos, protozoarios, y bacterias

 Incluye

MICROSCOPIOS
 Ojo

humano 0.2mm.

 Microscopio

0.2 micras.

óptico , resolución máxima

 Microscopio

electrónico, resolución máxima 0.5nm

TAMAÑO DE LOS MICROORGANISMOS
• Es una característica para
cada grupo microbiano • Se mide en micras (1 µ = 10-6 m)

ESTUDIO MICROSCÓPICO
Laforma de preparar las muestras de los microorganismos para su estudio, depende del tipo de microscopio (electrónico, de fluorescencia, de contraste de fases, óptico de campo claro, óptico de campo obscuro, et.), del propósito de estudio y de la clase de organismo. Para la observación de diversas entidades con el microscopio óptico de campo claro se puede utilizar:

Preparaciones:
1. En fresco2. Fijas y teñidas

PREPARACIÓN EN FRESCO PROCEDIMIENTO
1. Gota de muestra en portaobjetos 2. Colocar cubreobjetos 3. Examinar al microscopio

PREPARACIONES EN FRESCO
También llamadas húmedas. Se emplean para el examen directo. Cuidados Muestra en un medio líquido Edad del cultivo Usar colorantes vitales; Ej. Rojo neutro Observar e por periodos cortos USOS •Ver microorganismos vivos en suestado natural. Visualizar células en estado“normal” •Movilidad •Tamaño real •Aerotaxia •Color •Estructuras internas DESVENTAJAS: •↓Oxígeno; cesa movimiento

IMPRONTA

Hongos filamentosos

PREPARACIÓN FIJA
Capa delgada de muestra extendida sobre un portaobjetos, secada a temperatura ambiente y después con un calentamiento moderado. Este extendido (frotis) debe ser lo suficientementedelgado para permitir el paso de la luz a través de él. Sirve para inmovilizar al microorganismo. Métodos para fijar Químicios: ácido ósmico Físicos: Calor

PREPARACIÓN FIJA TEÑIDA
Es un frotis teñido con algún colorante, con el fin de:  Aumentar el contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea. Mejorar la estrategia para observar forma, tamaño y/o agrupación.

Tinciones

Simples1 colorante

Selectivas
2 colorantes

Diferenciales
2 colorantes y mordentes

TINCIONES
Tinción: Es la combinación química de las moléculas del colorante con las de la célula microbiana. Positivas: Se colorea directamente a los microorganismos o a las estructuras en estudio, sobre un fondo claro. Negativas: Se oscurece el fondo de la preparación y se observa incoloro al microorganismo.COLORANTE


Compuestos coloridos que al combinarse con otras sustancias les confieren color. Compuestos orgánicos que contienen radicales:

a. Cromóforos: Tiene grupo nitro (-NO2) y azo (-N=N-). Es la que imparte el color.


Auxocromos: Radicales -OH y –NH2. Es la parte que forma la sal, le permite disociarse y combinarse.

CLASIFICACIÓN DE ACUERDO AL COMPORTAMIENTO QUÍMICO DELCOLORANTE
Cromóforo ácido o aniónico): Carga negativa. Tiñen material básico. Ej. Eosina, fucsina ácida, rojo congo.
EOSINA

Cromóforo básico o catiónico: Carga iónica positiva, tiñen material ácido. Ej. Azul de metileno, cristal violeta, safranina.

Azul de metileno

TEORÍA DE LA COLORACIÓN
Física: Fijación mecánica del colorante seguida de fenómenos de adsorción o atracción hacia elorganismo. Química: Fijación de los colorantes y los componentes del organismo, formando una sal.

TEORÍA DE LA COLORACIÓN
Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos, los cuales poseen cargas negativas en forma de grupo fosfato, que se combinan con colorantes cargados positivamente, por eso dan un color de contraste como fondo. Por lo tanto, algunos microorganismos se tiñen por...