Tinción de Gram y tinción de Ziehl-Nieelsen.


Reporte No. 2
Tinción de Gram y tinción de Ziehl-Nieelsen.







Tinción de Gram y Tinción de Ziehl-Nieelsen

Introducción:
Tinción de Gram:
Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciaciónbacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella, eso se debe al tipo de pared celular que posee la bacteria.

En el análisis de muestras clínicas cumple varias funciones:
Identificación de la bacteria que causa la infección.
Aislamiento bacteriano. Los morfotiposbacterianos identificados en la tinción de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos.
A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos:
Los cocos son de forma esférica. Pueden aparecer aislados después de la división celular (Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse demanera irregular (Estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.
También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rígida o espiroquetas si son blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los designa vibrios.



Tinción deZiehl-Nieelsen:
La tinción de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich, para poner de manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis en muestras clínicas de pacientes.
Esta técnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).
La técnica de Z-N fuerza la penetración de la fucsina básica en la pared celular mediante la accióncombinada del fenol y el calor, que aumentan la fluidez de la capa de ácidos micólicos: el calor “derrite” el componente ceroso y el fenol actúa a modo de disolvente, permitiendo el paso del colorante básico que se une a los ácidos micólicos con carga negativa. Cuando cesa la aplicación de calor, se elimina el exceso de fenol mediante un lavado con agua, la pared recupera su consistencia cerosa, pero lasmoléculas de fucsina quedan atrapadas en su espesor.
Con la coloración de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos delgados, ligeramente curvos, rojo fucsia, destacándose claramente contra el fondo azul.
La observación microscópica la debe realizarse con oculares de 20X y objetivo de inmersión 100X.
Cada campo microscópico debe observarse en superficie y profundidad, para esto se utilizaconstantemente el tornillo micrométrico. Los bacilos aparecen como bastoncillos delgados de color rojo (debido a la fucsina), en pares o agrupados sobre un fondo azul. La contabilidad debe seguir una pauta uniforme de observación leyendo de izquierda a derecha del extendido un mínimo de 100 campos útiles distribuidos en el total del extendido.
El criterio a seguir en bacilos copia es: el númerode campos varía según la cantidad de bacilos encontrados:
1. Si no se encuentran bacilos debe examinarse por lo menos 100 campos útiles.
2. Si se encuentran de 1 a 10 bacilos por campo es suficiente observar 50 campos.
3. Si se encuentran más de 10 bacilos por campo es suficiente observar 20 campos.


Informe de resultados se realiza de la siguiente manera:
Negativo: no se observan BAAR en100 campos observados.
Positivo +: se observan menos de un bacilo por campo en promedio en 100 campos observados.
Positivo ++: se observan de 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados.
Positivo +++: Se observan más de 10 bacilos por campo en promedio en 20 campos observados.
Es necesario encontrar como mínimo 4 BAAR en la Bacteria para reportarlo positiva, si se encuentran...