Tinción de gram

Tinción de Gram

Guía de estudio para el Laboratorio Microbiología
Elaborado por:

Adien A. Lugo Báez MD

Santiago, República Dominicana 2008

Introducción
Esta guía de estudio está ideada para facilitar al estudiante las herramientas teóricas que permitirán comprender los protocolos prácticos para la sesión de laboratorio que comprende la Tinción de Gram como componente fundamentalpara la identificación de agentes bacterianos. La importancia del estudio de los agentes patógenos al ser humano comprende un gran espectro de disciplinas dentro de la medicina de forma tal que se busquen nuevas alternativas para el abordaje tanto diagnostico (microbiológico) como de manejo (farmacológico) de estas entidades para reducir al máximo el riesgo de infección y la morbimortalidadasociada. Es por eso que surge como componente básico de las ciencias medicas la microbiología la cual trata de entender la organización, composición y características de los principales agentes patógenos al ser humano. Dentro del estudio de los microbios, el abordaje ocurre clasificándolos de acuerdo al reino biológico a que pertenezca. En esta clasificación encontramos a las bacterias, hongos,protozoarios, anélidos (platihelmitos y nematelmitos), virus y priones. Los agentes bacterianos se pueden clasificar por múltiples formas de acuerdo a las características morfológicas, medios de cultivos y tinciones. Las bacterias son descoloridas y usualmente invisibles a la luz del microscopio por lo que colorearlas con tinciones ha permitido visualizarlas.

Membrana Citoplasmática
El citoplasmabacteriano está rodeado por una membrana citoplasmática que se encuentra inmediatamente por dentro de la capa de peptidoglicanos de la pared celular de las bacterias Gram + y adyacente al espacio periplasmático en las bacterias Gram -. La estructura básica de la membrana citoplasmática es una bicapa fosfolipídica(3060%) en las que están incluidas varias proteinas (50-70%). La mayoría de las membranasde las celulas bacterianas contienen fosfatidilglicerol, fosfatidiletanolamina y difosfatidilglicerol (no contiene esteroles). La membrana celular bacteriana contiene enzimas que actúan en la respiración celular y en la fosforilación oxidativa, la biosíntesis de peptidoglicanos y en la biosíntesis de la membrana externa de las bacterias Gram - . También actua en la síntesis y secreción de enzimasy toxinas bacterianas. La membrana retiene metabolitos y excluye compuestos externos. Las proteinas membranales están involucradas en el transporte de electrones y la fosforilación oxidativa. La biosíntesis de lípidos complejos, síntesis de los constituyentes de la pared celular y la replicación del DNA. Involucradas en el transporte activo de materiales hacia el citoplasma denominadas permeasas.PARED CELULAR BACTERIANA
1) Brinda rigidez estructural : porque está constituida por peptidoglicanas que es un esqueleto de residuos de carbohidratos formados por unidades alternas de Nacetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico unidos por enlaces β -1,4 Tetrapéptidos cortos (unidos por aminoácidos D y L) se encuentran unidos a los residuos de ácido N-acetilmurámico por medio de un enlacepeptídico al grupo lactilo de C3. Estos aminoácidos son: ácido glutámico y alanina (bacterias Gram +) y ácido meso diaminopimélico (bacterias Gram -) 2) Confiere la forma a la célula 3) Crea una barrera física contra el medio ambiente externo

Pared Celular de las bacterias Gram +
1) Grosor de casi 80 nm 2) Constituida por varias capas peptidoglicanos (40-80% del peso seco de algunas paredescelulares) 3) Dentro de la matriz de peptidoglicanos se encuentran una variedad de proteínas, polisacáridos y moléculas únicas denominadas ácido teicoicos (son polímeros de unidades de

ribitol -5 carbonos- o glicerol -3 carbonos- unidos por enlaces fosfodiéster. Los ácidos lipoteicoicos están unidos a la capa externa de la membrana celular y se extiende dentro de la pared celular Los ácidos...