Tipos de electroforesis

Tipos de electroforesis


Existen tres tipos de electroforesis: de frente móvil, zonal y continua.
En la electroforesis de frente móvil, las macromoléculas están presentes en toda la disolución y su posición (el frente que separa la disolución del disolvente) se determina en función del tiempo por óptica de Schliren. Este método, que es equivalente en muchos aspectos al de frente desedimentación, es una técnica analítica que ha sido utilizada principalmente para la determinación de las movilidades y puntos isoeléctricos de las proteínas. Sin embargo, dada la poca utilidad de la determinación cuantitativa de la movilidad, la electroforesis de frente móvil es muy poco usada.
En la electroforesis zonal, la disolución a tratar se aplica como una mancha, o como una banda, y laspartículas migran a través de un disolvente, utilizando además un medio soporte inerte y homogéneo, tal como el papel o ciertos tipos de geles. Esta técnica es utilizada para analizar mezclas, para determinar la pureza de una muestra, para detectar cambios de movilidad o de conformación y para la purificación de sustancias. La determinación cuantitativa de la movilidad nunca se lleva a cabo, a causa dela imposibilidad virtual de tener en cuenta teóricamente los efectos que el material de soporte introduce en el proceso electroforético.
En la electroforesis continua, la muestra se aplica también en una zona, pero se añade continuamente a lo largo del proceso.
En los siguientes apartados se describen varias técnicas electroforéticas.

Electroforesis zonal
En la electroforesis zonal se colocauna mancha o una fina capa de muestra en contacto con un medio semisólido o gelatinoso, se aplica un campo eléctrico y las partículas migran atravès del soporte. Como las moléculas se aplican en una zona, se utilizan pequeñas cantidades de muestra, pudiendo conseguirse entonces una completa separación de todos los componentes. La función del medio de soporte es, principalmente, evitar lasperturbaciones mecánicas y las corrientes de convección que puedan producirse por cambios de temperatura o por la elevada densidad de las disoluciones que contienen la muestra. De todos modos, el medio de soporte absorbe algunas veces varias de las especies moleculares o actua como un tamiz molecular, teniendo de este modo un efecto cromátografico que puede contribuir en cierto grado a la separación.Figura 1. Disposición experimental para la electroforesis en papel o bajo voltaje.

Electroforesis en papel
La figura 1 muestra el montaje típico para la electroforesis en papel a bajo voltaje (20V/cm). La tira de papel se sumerge primero en la disolución tampón y luego se coloca en la cubeta, tal y como se indica. La muestra se aplica seguidamente bien como una mancha o bien como unalínea. El papel queda encerrado en una cubeta para evitar la evaporación y se aplica el voltaje deseado. Cuando la separación llega a su fin, se recoge el papel y se seca. Si la muestra contiene suficiente material, este puede ser localizado por su color, fluorescencia o por diversos métodos de tinción. Si requiere una medición cuantitativa, puede realizarse una elución del colorante y determinarlopor espectrofotometría. Debido a que la incorporación de colorante es raramente cuantitativa, la exactitud de este método es del 20% aproximadamente. Si la muestra es radiactiva, las manchas pueden ser localizadas cortando el papel y contando la radiactividad, o por autorradiografia del papel entero, utilizando una película sensible a los rayos X. La combinación de colorantes con radiactividadpara determinar que sustancias son radiactivas, es una técnica especialmente útil. La electroforesis en papel a bajo voltaje ha sido una de las técnicas mas utilizadas para el análisis de mezclas proteicas que se separan mal por cromatografía. Sin embargo, esta técnica ha sido superada en muchas de sus aplicaciones por la electroforesis en gel.
La electroforesis a bajo voltaje es ineficaz para...