tipos de microscopios

1. TIPOS DE MICROSCOPÍA:
1.1 Microscopía óptica normal (de campo brillante coloreado): El material a
observar se colorea con colorantes específicos que aumentan el contraste y revelan
detalles que no aprecian de otra manera.
1.1.1 Microscopía de campo brillante: el material se observa sin coloración. La luz
pasa directamente y se aprecian detalles que estén naturalmente coloreados.
Elmicroscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono
hueco concentrado sobre el espécimen. El campo de visión del objetivo se encuentra en
la zona hueca del cono de luz y sólo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las
porciones claras del espécimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos
minúsculos que se están analizando aparecen como una luz brillantesobre el fondo. Esta
forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin
manchas, invisibles con iluminación normal.
1.1.2 Microscopía en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el
contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es ideal para
especimenes delgados, o células aisladas. El microscopio de fase ilumina elespécimen
con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el
microscopio de fase el cono de luz es más estrecho y entra en el campo de visión del
objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la
luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de
iluminación provoca variaciones minúsculas en elíndice de refracción de un espécimen
transparente, haciéndolo visible. Este tipo de microscopio es muy útil a la hora de
examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biología y medicina
1.1.3 Nomarski, microscopía diferencial de contraste de interferencia (DIC). Utiliza
dos rayos de luz polarizada y las imágenes combinadas aparecen como si la célula
estuviera proyectandosombras hacia un lado. Fue diseñado para observar relieves de
especimenes muy difíciles de manejar, es muy utilizado en los tratamientos de
fertilización in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espécimen es muy grueso para usar
contraste de fases

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1.2 Microscopía de fluorescencia: una sustancia natural en las células o un colorante
fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz deluz, emitiendo parte de la
energía absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como fluorescencia. La luz
fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del
colorante.
Microscopio de fluorescencia:
Microscopio que incorpora una lámpara especial, que actúa emitiendo una luz
excitadora de los fluorocromos, con los que se tiñen las muestras a observar, y queposee además un filtro especial, que permite el paso de la luz emitida por el
fluorocromo.
1.3 Un microscopio confocal es un microscopio capaz de obtener imágenes
tridimensionales de la célula. Se basa en un principio similar al de un microscopio de
fluorescencia, pero se utilizan dos diafragmas confocales (uno antes de la muestra y otro
después) capaces de enfocar la iluminación en un únicopunto de la muestra. Se utiliza
un láser como fuente luminosa, y con él se va barriendo la muestra por todo su
volumen, plano a plano, creando muchas imágenes bidimensionales que un ordenador
interpreta, generando finalmente una imagen tridimensional del objeto.
Para observar preparaciones con este microscopio es necesario teñirlas con sustancias
fluorescentes o marcarlas con sustanciasconjugadas con fluorocromos, como los
anticuerpos.

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1.2.2 Técnicas utilizadas en el confocal:
1.2.2.1 Marcajes con múltiples fluoróforos
Suele ser lo más utilizado. En este caso se detectan varios marcadores simultáneamente
utilizando diferentes fluoróforos. Lo más importante es que dichos fluoróforos tengan
unos perfiles de excitación y emisión lo menos solapantes posible y tener el...