Tirosina
Páginas: 8 (1769 palabras)
Publicado: 7 de febrero de 2013
PALABRAS CLAVES
INTRODUCCION
Es un hecho de observación frecuente que las patatas, manzanas, plátanos y otras frutas adquieren una coloración marrón al ser dañadas o cortadas. Esto se debe a la conversión del aminoácido tirosina en el pigmento melanina de acuerdo con la siguiente secuencia de reacciones donde la acción de la enzima tirosinasa sobre el aminoácido tirosina, que en presenciade oxigeno, lo va convirtiendo secuencialmente en dopa, dopaquinona y dopacromo (café oscuro), hasta que termina en un pigmento muy oscuro llamado melanina.
El resultado de color oscuro se conoce como pardeamiento enzimático es una reacción de oxidación en la que interviene como substrato el oxígeno molecular, catalizada por un tipo de enzimas que se puede encontrar en prácticamente todos losseres vivos, desde las bacterias al hombre. En el hombre es la responsable de la formación de pigmentos del pelo y de la piel. en los cefalópodos produce el pigmento de la tinta, y en los artrópodos participa en el endurecimiento de las cutículas del caparazón, al formar quinonas que reaccionan con las proteínas, insolubilizándolas. en los vegetales no se conoce con precisión cual es su papelfisiológico.
El enzima responsable del pardeamiento enzimático recibe el nombre de polifenoloxidasa, fenolasa o tirosinasa, en este último caso especialmente cuando se hace referencia a animales, ya que en ellos la tirosina es el principal substrato. También se ha utilizado el término cresolasa, aplicado a la enzima de vegetales. se descubrió primero en los champiñones, en los que el efecto depardeamiento tras un daño mecánico, como el corte, es muy evidente.
En la siguiente práctica de laboratorio se extraerá la enzima trosinasa de diferentes fuentes como lo son el banano y aguacate. Además se determinara la actividad de la tirosinasa, utilizando como sustrato L-DOPA. Para finalizar se compararan los resultados de la actividad de la tirosinasa en las fuentes utilizadas.
MATERIALES* Solución de fosfato 0.1M en buffer (pH= 7.2)
* Solución de L- DOPA0.03M en buffer (pH= 6.0)
* Fuentes de tirosina: banano y aguacate
* Tela para filtrar
* Mortero
* Fotocolorímetro
* Hielo
PROCEDIMIENTO
Se tomaron 15 gr de banano y se le agregaron 60ml de buffer de fosfato pH= 6 más 1 cucharada de arena. Luego se macero durante unos minutos y posteriormentese filtro con la ayuda de una tela. El filtrado fue llevado a la centrifugadora durante 5 minutos; luego el sobrenadante fue introducido en hielo para conservar la enzima e impedir su degradación. De este sobrenadante se tomaron 2 ml y se le adicionaron 8 ml de agua destilada. Esta última solución fue llamada EXTRACTO.
Para la preparación de blanco se tomaron 1 ml de extracto y se leagregaron 4 ml de buffer más 1 ml de agua destilada.
CONDICIONES NORMALES
Se tomaron 1ml de extracto y se le agregaron 54ml de buffer más 1ml de L- DOPA
CALENTAMIENTO
se tomaron 1 ml de extracto Y se le agregaron 4 ml de buffer pH : 6 ; luego se calentó durante 5 minutos en un baño de María hirviendo, pasado este tiempo se dejo enfriar y se le agrego 1 ml de L- DOPA.
INHIBIDOR
Se tomaron 1ml de extracto Y se le agregaron 4 ml de buffer pH: 6; luego se le adicionaron 5 gotas del inhibidor (cianuro de sodio NaCN) y posteriormente 1 ml de L- DOPA.
Para finalizar se midieron las absorbancias de la enzima a condiciones normales, a calentamiento y con el inhibidor; esto se hizo cada 10 minutos durante 1 hora.
Cabe decir que con el aguacate se realizo el procedimiento anterior ydespués de tener los datos de absorbancia de las dos fuentes se compararon la actividad de la tirosina en las diferentes frutas y se señalo quien tenía mayor concentración de la enzima.
RESULTADOS
1. Datos de absorbancias del banano
Tabla 1. Absorbancias a = 420 nm y un tiempo de 0 segundos
t= 0s | Abs 1 | Abs2 | Promedio |
Cond norm | 0.431 | 0.433 | 0.432 |
Calentamiento |...
INTRODUCCION
Es un hecho de observación frecuente que las patatas, manzanas, plátanos y otras frutas adquieren una coloración marrón al ser dañadas o cortadas. Esto se debe a la conversión del aminoácido tirosina en el pigmento melanina de acuerdo con la siguiente secuencia de reacciones donde la acción de la enzima tirosinasa sobre el aminoácido tirosina, que en presenciade oxigeno, lo va convirtiendo secuencialmente en dopa, dopaquinona y dopacromo (café oscuro), hasta que termina en un pigmento muy oscuro llamado melanina.
El resultado de color oscuro se conoce como pardeamiento enzimático es una reacción de oxidación en la que interviene como substrato el oxígeno molecular, catalizada por un tipo de enzimas que se puede encontrar en prácticamente todos losseres vivos, desde las bacterias al hombre. En el hombre es la responsable de la formación de pigmentos del pelo y de la piel. en los cefalópodos produce el pigmento de la tinta, y en los artrópodos participa en el endurecimiento de las cutículas del caparazón, al formar quinonas que reaccionan con las proteínas, insolubilizándolas. en los vegetales no se conoce con precisión cual es su papelfisiológico.
El enzima responsable del pardeamiento enzimático recibe el nombre de polifenoloxidasa, fenolasa o tirosinasa, en este último caso especialmente cuando se hace referencia a animales, ya que en ellos la tirosina es el principal substrato. También se ha utilizado el término cresolasa, aplicado a la enzima de vegetales. se descubrió primero en los champiñones, en los que el efecto depardeamiento tras un daño mecánico, como el corte, es muy evidente.
En la siguiente práctica de laboratorio se extraerá la enzima trosinasa de diferentes fuentes como lo son el banano y aguacate. Además se determinara la actividad de la tirosinasa, utilizando como sustrato L-DOPA. Para finalizar se compararan los resultados de la actividad de la tirosinasa en las fuentes utilizadas.
MATERIALES* Solución de fosfato 0.1M en buffer (pH= 7.2)
* Solución de L- DOPA0.03M en buffer (pH= 6.0)
* Fuentes de tirosina: banano y aguacate
* Tela para filtrar
* Mortero
* Fotocolorímetro
* Hielo
PROCEDIMIENTO
Se tomaron 15 gr de banano y se le agregaron 60ml de buffer de fosfato pH= 6 más 1 cucharada de arena. Luego se macero durante unos minutos y posteriormentese filtro con la ayuda de una tela. El filtrado fue llevado a la centrifugadora durante 5 minutos; luego el sobrenadante fue introducido en hielo para conservar la enzima e impedir su degradación. De este sobrenadante se tomaron 2 ml y se le adicionaron 8 ml de agua destilada. Esta última solución fue llamada EXTRACTO.
Para la preparación de blanco se tomaron 1 ml de extracto y se leagregaron 4 ml de buffer más 1 ml de agua destilada.
CONDICIONES NORMALES
Se tomaron 1ml de extracto y se le agregaron 54ml de buffer más 1ml de L- DOPA
CALENTAMIENTO
se tomaron 1 ml de extracto Y se le agregaron 4 ml de buffer pH : 6 ; luego se calentó durante 5 minutos en un baño de María hirviendo, pasado este tiempo se dejo enfriar y se le agrego 1 ml de L- DOPA.
INHIBIDOR
Se tomaron 1ml de extracto Y se le agregaron 4 ml de buffer pH: 6; luego se le adicionaron 5 gotas del inhibidor (cianuro de sodio NaCN) y posteriormente 1 ml de L- DOPA.
Para finalizar se midieron las absorbancias de la enzima a condiciones normales, a calentamiento y con el inhibidor; esto se hizo cada 10 minutos durante 1 hora.
Cabe decir que con el aguacate se realizo el procedimiento anterior ydespués de tener los datos de absorbancia de las dos fuentes se compararon la actividad de la tirosina en las diferentes frutas y se señalo quien tenía mayor concentración de la enzima.
RESULTADOS
1. Datos de absorbancias del banano
Tabla 1. Absorbancias a = 420 nm y un tiempo de 0 segundos
t= 0s | Abs 1 | Abs2 | Promedio |
Cond norm | 0.431 | 0.433 | 0.432 |
Calentamiento |...
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