Tirosinasa

ACTIVIDAD EENZIMATICA: TIROSINASA






Ángela María Guerrero Bolaños
Geraldine Ramírez Salgado
María José Bolaños Hernández
Daniel Santiago Chávez Goyes



INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRESENTADO A: ARLEY CAMILO PATIÑO





UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y ALIMENTARIAS
QUÍMICA FARMACÉUTICA
MEDELLÍN
2015

INTRODUCCIÓN
Los organismos vivos, para llevar a cabosus funciones vitales y mantenerlas en un estado óptimo constante, realizan un sinnúmero de reacciones bioquímicas, casi totalmente mediadas por un conjunto de catalizadores biológicos esenciales conocidos como enzimas, las cuales, en su mayoría, son proteínas. Ciertas moléculas de RNA también poseen actividad enzimática.
Las enzimas, debido a su carácter catalítico, aumentan entonces lavelocidad de las diferentes reacciones biológicas gracias a la disminución del estado de transición. Dicha velocidad está definida por la concentración de sustrato presente y la posterior formación del complejo enzima-sustrato (ES); cuando la enzima se encuentra saturada de sustrato, es decir, está completamente bajo la forma ES, alcanzará su velocidad máxima, donde la velocidad se vuelve constante. Laactividad enzimática también comprende otro parámetro, la constante de Michaelis (KM), la concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la mitad de la máxima, o bien, se han ocupado la mitad de los sitios activos de la enzima. (1)
La velocidad de la actividad enzimática puede verse afectada por diversos factores tales como la temperatura y el pH. Un aumento de la temperaturamás allá del rango permitido para la enzima) o un pH inadecuado ocasionarían rompimientos de las fuerzas no covalentes que mantienen la estructura enzimática, en el primer caso, así como ionización o desionización de las cadenas laterales de los aminoácidos que la conforman, en el segundo. De esta manera pierden su estructura nativa o funcional y la actividad decrece enormemente o en su totalidad.La velocidad también puede afectarse por la presencia de cofactores, coenzimas, inhibidores o a una mayor concentración de sustrato. (2)
La tirosinasa es una enzima capaz de realizar dos mecanismos de oxidación (actividad monooxidasa y oxidasa), además de poseer cuatro estados diferentes de oxidación (deoxi-, oxi-, met- y deact-tirosina). Esto es permitido gracias a la presencia de Cu2+ en susitio activo, el cual tiene la capacidad de unirse al O2. Una de las funciones más reconocidas de la tirosinasa es la oxidación de la tirosina a dopaquinona para la posterior producción de melanina, polímeros heterogéneos de carácter polifenólico, cuyo color varía desde el amarillos hasta el negro. Además de estar presente en la piel humano y en otro organismo, también es el responsable delpardeamiento de frutas, hortalizas y hongos cuando en la postmaduración. (3-4)
En esta práctica se evaluó la actividad catalítica en el tiempo de la tirosinasa proveniente de la papa, mediante su exposición al sustrato L-metildopa y posterior medición de la absorbancia del producto obtenido (L-metildopacromo), por espectrofotometría. Para ello, se sometió a la enzima a unas condiciones de pH,temperatura y concentración determinadas.

DATOS Y RESULTADOS

Tabla









1. Cambio de concentración de extracto enzimático y sus respectivos valores de absorbancia












Absorbancia
pH


6.0
7.2
Tiempo (seg) tubo



0.0
0,234
0,172
0,109
20
0,279
0,182
0,181
40
0,316
0,187
0,196
60
0,352
0,199
0,213
80
0,384
0,211
0,225
100
0,426
0,216
0,238
120
0,456
0,228
0,252
140
0,482
0,232
0,204
1600,508
0,244
0,275
180

0,252

Tabla 2. Variación del pH y respectivos valores de absorbancia.












Absorbancia
Temperatura

2°C
37°C
Tiempo (seg) tubo


0.0
0.078
0,153
20
0,085
0,170
40
0,097
0,183
60
0,107
0,198
80
0,116
0,209
100
0,127
0,219
120
0,137
0,232
140
0,147
0,242
160
0,156
0,249
180
0,166
 
Tabla 3. Cambios de temperatura y respectivos valores de absorbancia.




CONCLUSIONES...