Toxicidad aguda

Ensayo de toxicidad aguda (efectos letales y subletales ) con Hydra attenuata | |[pic]Document(s) 8 of 16 [pic]
Yolanda Pica Granados, Alicia Ronco, Maria Consuelo Díaz Baez
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4.3.1 Principio
Los pólipos de agua dulce del género Hydra son microinvertebrados de la clase Hydrozoa de ampliadistribución geográfica y se caracterizan por ser animales pluricelulares, cuyas células se disponen en dos capas: la epidermis y la gastrodermis, separadas por una mesoglea gelatinosa, la cual encierra una cavidad digestiva continua que se comunica directamente con el exterior a través de una abertura o boca. Algunas de las células intersticiales de la epidermis dan origen a los órganos característicos dedefensa y ataque. Los más conocidos son los nematocistos, que corresponden a los miembros más simples de esta clase. En el extremo inferior presentan un pedúnculo con una base que se adhiere a diferentes superficies; en el extremo anterior se encuentra la boca, rodeada de cinco tentáculos (Campbell & Bode, 1983). Su tamaño varía de 5 a 20 mm de longitud, y de 2 a 3 mm de espesor (figura 4.3.1).
Laespecie Hydra attenuata es empleada como organismo de prueba por la facilidad de su cultivo en laboratorio, su rápida reproducción, su estructura primaria (ectodermo, mesodermo y endodermo), que favorece el intercambio intra e intercelular aumentando su potencial para la detección de tóxicos, así como el presentar cambios morfológicos fácilmente reconocibles bajo condiciones progresivas deintoxicación (Trottier et al., 1997).
Los ensayos de toxicidad con Hydra attenuata permiten determinar subletalidad y letalidad potencial de sustancias químicas puras, aguas residuales domésticas e industriales, lixiviados, aguas superficiales o subterráneas, agua potable y agua de poro de sedimentos, entre otros.
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Figura 4.3.1. Morfología de Hydra attenuata.
Las pruebas de toxicidad con Hydraattenuata tienen una duración máxima de 96 h, tiempo durante el cual los organismos son expuestos al tóxico o muestran problemas. Durante el ensayo, diariamente se hace un examen microscópico y se registran los cambios morfológicos producidos. La exposición de los organismos a compuestos tóxicos da lugar a una serie de cambios morfológicos (efectos subletales) y, dependiendo de la concentración,puede producir la muerte de los individuos (efectos letales). Los resultados de las pruebas permiten, además de la estimación de la CL50 y la CE50, establecer la LOEC, la NOEC y la TOEC (Blaise & Kusui, 1997).
4.3.2 Reactivos y soluciones
Todos los reactivos utilizados deben tener una calidad ACS o, por lo menos, un 99% de pureza. Para la preparación de las soluciones se debe utilizar aguadestilada en vidrio o agua calidad Millipore Super Q.
Medio de cultivo de Hydra
Para el mantenimiento del cultivo y la limpieza del mismo después del proceso de alimentación, se utiliza el medio cuya formulación se presenta en la tabla 4.3.1.
|Tabla 4.3.1. Reactivos utilizados en la preparación de medio de Hydra. |
|Reactivo|Cantidad |
|Cloruro de calcio: CaCl2•2H20 |2,94 g |
|N-tris (hydroximetil)metil 1-2aminoetanosulfónico, Buffer TES |2,2 g |
|Ácido etilén-diamino-tetraacético (EDTA) |0,080 g|
|Agua destilada |20,0 L |

Para la preparación del medio se disuelven inicialmente los compuestos en 1 L de agua, posteriormente se coloca la solución en un recipiente de polipropileno o equivalente (material inerte), y se completa a volumen (20 L) con agua destilada. El pH del medio debe ser...