TOXICOLOGÍA



REPORTE DE PRÁCTICA #6
DETERMINACIÓN DE GLUCOSINOLATOS (PARTE I Y II)


Objetivo

Cuantificación de glucosinolatos presentes en vegetales

Introducción

Los glucosinolatos (también llamados tioglicósidos) son S-glicósidos en los que la glicona es b-D-tioglucosa y la aglicona es una oxima sulfatada.

Tabla 1. Estructura, mecanismo e hidrólisis de los glucosinolatos.



Elradical R es el que diferencia a los diversos glucosinatos. Se encuentran en plantas dicotiledóneas, y son especialmente abundantes en la familia de las Brassicaceae (crucíferas). Constituyen un mecanismo de defensa para la planta (Biomoleculas).

Desde hace muchos años los glucosinolatos presentes en vegetales han sido objeto de un gran interés científico, tanto por problemas relacionados con lasalud como por los beneficios saludables que de ellos se esperan. Los glucosinolatos se encuentran fundamentalmente en vegetales del género Brassica (por ejemplo, repollo, coliflor, brécol, lombarda y coles de Bruselas) Se conocen más de 90 diferentes tipos de glucosinolatos. Pueden hidrolizarse y dar lugar a compuestos que, en los primeros estudios que se llevaron a cabo, se creyó que erantóxicos y mutagénicos. Por esta razón, los agricultores desarrollaron y comercializaron variedades de colza de bajo contenido en glucosinolatos. Pero estos efectos han sido cuestionados y se han propuesto nuevas investigaciones focalizadas en los efectos beneficiosos de los glucosinolatos y de los productos de su degradación (GDPs). Estudios epidemiológicos han puesto de manifiesto los aspectossaludables de la ingesta de vegetales del género Brassica, como puede ser la disminución del riesgo de padecer cáncer de pulmón, estómago, recto y colon (T. Johnson).


Marco teórico

Se ha reportado que el consumo de grandes cantidades de col o vegetales relacionados pueden causar hipertrofia de la glándula tiroides (bocio). Los factores productores de bocio de algunas crucíferas y especies delgénero Brassica, como rábano, col, brócoli, etcétera, derivan de compuestos llamados tioglucósidos que se conocen actualmente como glucosinolatos. Los productos catabólicos de los glucosinolatos, los isotiocianatos, reaccionan con los grupos amino de la lisina y modifican la estructura proteica. Esta modificación a nivel de la tubulina de los axones, es similar a la que se produce por otras vías enlas neuropatías diabética, alcohólica y por agentes químicos, puede fundamentar bioquímicamente un posible efecto neurotóxico por la ingestión sostenida de glucosinolatos con la dieta.

Desarrollo de la práctica

Reactivos empleados:

Ácido caprílico
Ácido clorhídrico 0.1N
Hidróxido de sodio 0.1N
Hidróxido de sodio 0.025N (Valorado)
Semillas de mostaza
Buffer de referencia pH 7 y 4Papaya

Preparación del extracto enzimático:

Se pesaron 100 g de papaya sin semilla, se trituraron con el mortero y se colocaron en una licuadora añadiendo 100 ml de agua destilada. Se molieron durante 2 minutos y se procedió a filtrar con manta de cielo, se colectó el filtrado en una probeta, llenando el volumen a 200 ml. Se vació el filtrado a un matraz Erlenmeyer de 250 ml y se incubó poruna hora a 37 °C.

Transcurrido el tiempo, se vació el extracto enzimático activo a un vaso de 250 ml y se neutralizó la acidez formada con la solución de NaOH 0.1N hasta llevarlo a pH 6, se llevó esta solución a un volumen de 250 ml con agua destilada y se guardó en el congelador durante una semana.

Preparación de la muestra:

Se pesaron 10 g de semilla de mostaza y se trituraron en unmortero, posteriormente se licuó durante 2 minutos adicionando 100 ml de agua destilada, posteriormente la solución se filtró en gasa y se procedió a neutralizar el extracto de la muestra a pH 6 y aforar al volumen inmediato superior con agua destilada. Por último se pasó el extracto a una botella y se congeló para usarlo posteriormente.

Determinación de glucosinolatos:

Tanto el extracto...