TOXOPLASMA ELISA IgM

TOXOPLASMA ELISA IgM
CAPTURE


TECNICA: Elisa de captura para IgM
CASA COMERCIAL: Vircell microbiologist

FUNDAMENTO
Se basa en la captura de IgM presente en la muestra por anticuerposanti-IgM unidos a la superficie de poliestireno. Las inmunoglobulinas que no se unen, son eliminadas en el proceso de lavado. En un paso posterior el antígeno conjugado con peroxidasa reacciona con lasIgM capturadas, y los que no se unen son eliminados por el lavado; el antígeno unido reacciona con el sustrato, para dar una reacción coloreada azul, que cambia a amarillo tras la adición de unasolución de parada.

MATERIALES Y REACTIVOS

Placa con pocillos
Vircell diluyente
Vircell IgM control positivo
Vircell IgM Control negativo
Vircell IgM cut off
Conjugado
Vircell TMB soluciónde sustrato
Solución de parada
Solución de lavado
Solución tamponada
Pipetas
Lavador de placas de ELISA
Incubadora
Espectrofotómetro de placas de ELISA con filtro de 450 nm y filtro dereferencia de 620 nm
Agua destilada

PROCEDIMIENTO

1. Tomar los posillos en donde se van a procesar las muestras, más otros cuatro pocillos: uno para el control positivo, control negativo y dos parael suero cut off.

A. MUESTRAS

Añadir 100 μl de diluyente
Añadir 5 μl de las muestras

B. CONTROLES
100 μl del control positivo
100 μl del suero cut off (en duplicado)
100 μl de controlnegativo

C. Tapar mediante lámina adhesiva e incubar en baño durante 60 minutos a 37±1ºC.
D. Retirar la lámina adhesiva
E. Aspirar el contenido de todos los pocillos
F. lavar cada uno deellos 5 veces con solución de lavado

G. Añadir 100 μl de conjugado reconstituido a todos los pocillos.
H. Tapar mediante lámina adhesiva e incubar en baño durante 60 minutos a 37±1ºC.
I. Retirar lalámina adhesiva

J. Aspirar el contenido de todos los pocillos
K. lavar cada uno de ellos 5 veces con solución de lavado

L. Añadir 100 μl de solución de sustrato a todos los pocillos.
M....