Tp1 y 2 ibmc

Turno de TP: 7
Grupo: 2
Integrantes:
* Brenda Fernández
* Germán Morales
* Alejandra Masgoret

Trabajo Práctico 1 y 2
“Preparación de DNA Plasmídico de Escherichia coli” Y “Electroforesis en gel de agarosa”

Introducción

Los plásmidos son unidades que contienen información genética extra-cromosómica, es decir, que no forman parte del DNA cromosómico (o genómico) delorganismo, por lo que no son necesarios para la supervivencia del mismo. Se encuentran en las bacterias y en algunas células eucariotas. Están superenrollados y su tamaño es pequeño comparado con el del DNA genómico. Aunque no son indispensables para la bacteria, le pueden conferir un valor adaptativo positivo según el medio en el que se encuentren, como la resistencia a antibióticos, entre otros.
Enbiología molecular y celular los plásmidos son utilizados como vectores, es decir agentes que se usan como medios de transmisión de un organismo a otro, siendo herramientas muy útiles en la ingeniería genética, y de común uso para los biólogos moleculares en el laboratorio.
Para poder realizar investigaciones con los plásmidos es necesario tener una buena cantidad de ellos aislados y por eso sedeben extraer de la bacteria. Extraer plásmidos de una bacteria requiere de varios pasos, que es lo que desarrollaremos en la primer parte del trabajo práctico.
Aún terminando la extracción, es importante ver que, efectivamente, se extrajeron los plásmidos y no otro material de la bacteria (o al menos no una cantidad significativa de otro material), para así asegurarse que cualquier uso posteriorque les demos en el laboratorio tendrá un alto nivel de confianza en sus resultados. Una forma para visualizar la calidad de nuestra extracción es la electroforesis en gel, que es un grupo de técnicas empleadas por los científicos para separar moléculas basándose en propiedades como el tamaño, la forma o la carga eléctrica. Electroforesis se refiere al movimiento que realizan las partículascargadas (migración) cuando son sometidas a un campo eléctrico. El gel se refiere a la matriz en la cual se separan las moléculas; este suele ser una red molecular de un polímero orgánico con consistencia gelatinosa, como pueden ser la poliacrilamida o la agarosa. En la segunda parte trabajo práctico, desarrollaremos la electroforesis en gel de agarosa, por ser el método utilizado en el laboratorio enel práctico nº2.

Objetivo:

Realizar la extracción de DNA plasmídico de un cultivo bacteriano de Escherichia coli , conteniendo el plásmido p-Bluescript II, a través de una lisis alcalina. Luego mediante la electroforesis en gel de Agarosa determinar el peso molecular de una muestra de los fragmentos de DNA plasmídico obtenidos anteriormente de longitud desconocida corriendo en paralelo unamuestra de longitud conocida y comparándolas.

1RA PARTE

Fundamento Teórico:

Bacterias: Plásmidos

Las bacterias se pueden clasificar en Gram positivas  y Gram negativas (Esterichia coli). La envoltura celular de las primeras tiene membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano que puede atrapar al color y teñirse. Esta última capa es muchomás delgada en las bacterias Gram  negativas, que no pueden teñirse. Además tienen una pared externa, que es una membrana lipídica con proteínas con una densidad de carga negativa.
 Estas bacterias además de su DNA cromosómico, sus proteínas, sales, RNA, azúcares y lípidos, tienen plásmidos, que son moléculas circulares de DNA doble cadena extracromosómicos, es decir independientes de loscromosomas. Se hallan superenrollados y su tamaño es relativamente pequeño comparado con el del DNA cromosómico: va desde miles de pares de bases hasta más de 103 pares de bases (el del DNA cromosómico es de aproximadamente 106 pares de bases).
Estas moléculas generalmente no son esenciales para las bacterias, aunque pueden proporcionarles distintas y variadas ventajas adaptativas según el medio en el...