TP2 IBMC


Introducción a la biologia molecular y celular




Trabajo práctico Nº:2


Preparación de DNA plasmídico de
Escherichia coli

Grupo 6:

Franco, Agustín

Heinze, Bárbara

Osorio, JonásIntroducción:

El TP nos introduce el concepto de DNA plasmídico, el cual es un material genético circular extra-cromosómico, en las bacterias, pueden tenerlo o no, ya que no es esencial, sin embargo, lespuede proporcionar una ventaja adaptativa (como la resistencia a un antibiótico). Dichos DNAs pueden estar copiados más de 200 veces (según su tipo) dentro de la misma bacteria.

Objetivo:

Lisar lasbacterias y diferenciar el DNA cromosómico del plasmídico para luego extraer este último.

Procedimiento:

Se siguió el procedimiento descripto en la guía utilizando las soluciones allí detalladas.Las cuales, respectivamente, tienen la función de resuspender las bacterias y comenzar la desestabilización gracias a su medio hipotónico, la segunda, es una solución alcalina altamente agresiva cuyafunción es lisar a las bacterias, y desnaturalizar proteínas y ácidos nucleicos, y la tercera es una solución de renaturalización, equilibra el PH neutralizando el alto PH obtenido luego de la segundasolución, luego, el DNA cromosómico y demás componentes orgánicos de las bacterias se renaturalizan incompletamente y al formarse una malla con las moléculas de SDS estos componentes precipitan y seforma un pellet, el DNA plasmídico sin embargo al ser pequeño puede renaturalizarse correctamente y se conserva en el sobrenadante. Por último se usó el etanol 70% para limpiar de sales al DNA,(nuestro grupo además utilizo en el último paso una solución de RNasa para purificar el DNA).


Resultado:

Se obtuvo un precipitado que se cree contiene el DNA plasmídico esperado.


Comparación delprocedimiento con el TP anterior:

DNA
Cromosómico
Plasmídico
Tris-HCl pH 7
Sí
Sí
Sacarosa
Sí, medio isotónico, la concentración de soluto no varía o varía muy poco (es un medio “cómodo” para la célula)...