TP5 IBMC


Introducción a la biologia molecular y celular



Trabajo práctico Nº:5



Actividad enzimática de la α-amilasa

Grupo 6:

Franco, Agustín

Heinze, Bárbara

Osorio, Jonás








Introducción:Existe varias formas de medir la actividad enzimática, algunas pueden ser medir la cantidad de sustrato o producto involucrados en la reacción. Pero además, se deben considerar los factores variables queafectan dicha reacción, como la temperatura, pH, concentraciones (de sustrato, de enzima, incluso sales, etc.), y otros. El almidón es el polisacárido usado como sustrato en este TP, el cual estáformado por dos monómeros distintos, la amilosa y la amilopectina. El primero, es el sustrato principal de la enzima, α-amilasa, utilizada en este TP, ya que solo presenta uniones α(1-4), las cualesdicha enzima se encarga de romper, el segundo en cambio, presenta algunas ramificaciones con uniones α(1-6) las cuales la enzima no puede romper.

Objetivo:

El objetivo es presenciar los cambios en laactividad enzimática al cambiar las variables antes mencionadas y tratar de llegar a una conclusión que explique el porqué de estos cambios. Además determinar una dilución óptima para la reacción dentrodel tiempo esperado y comprobar las diferencias entre los pre-tratamiento y los tratamientos.

Procedimiento:

Se siguió el procedimiento descripto en la guía, con los preparados correspondientes dela solución con Lugol, los tubos de ensayo y algunos de los tratamientos posteriormente listados, los cuales algunos fueron hechos antes de la medición de la actividad enzimática (pre-tratamientos),y en otros el cambio de variables ocurre durante la actividad. Nuestro grupo hizo las pruebas con pH 12 y NaCl.


Resultados:



Grupo nº:
Dilución óptima
pH salival
Tiempo de ref.
Pre-tratamientoTratamiento




Proteinasa K
100ºC
pH 2
pH 12
0ºC
Tº amb.
70ºC
NaCl
2
1/10
7-8
3’
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S/C
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S/C
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4
1/40
8
6’
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S/C
S/C
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6
1/30
8
6’30’’
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S/C
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