Trabajo Biofisica

Materiales de Laboratorio
Pinza Optica
Es un aparato que atrapa objetos. Estos objetos son bolitas de poliestireno de
1m de diámetro fijados en una zona cuyo tamaño es de sólo 1m. Su
funcionamiento se basa en la propiedad que tiene la luz de atrapar objetos por
la presión de radiación ejercida por un haz láser en el foco de un objetivo de
microscopio.
Para que se utiliza
Las partículasatrapadas pueden ser manipuladas.
Se pueden también medir fuerzas muy pequeñas entre 1 y 100
pN (1 pN=10-12N). Estas fuerzas permiten el estudio de la
mecánica de sistemas biológicos. Se han utilizado para
examinar la fuerza necesaria para estirar moléculas
individuales de ADN, estudiar el movimiento browniano y
manipular las células. Dos bolitas atrapadas: una por la trampa óptica,
laotra por la pipeta y entre ellas es atrapada una molécula de ADN

ELASTICIDAD DE ADN
Describir primero la base propiedades mecánicas de descifrar el ADN única molécula de técnicas de manipulación. Luego demuestran cómo el conocimiento de estas propiedades ha sido utilizado para diseñar los ensayos de molécula única para hacer frente a los mecanismos enzimáticos de diferentes translocases. Sepresenta en cuatro sola molécula de sistemas de manipulación abordar el mecanismo de helicases diferentes específicamente diseñadas utilizando sustratos de ADN: UvrD de detección de actividad enzimática en una estirada nicked molécula de ADN, HCV NS3 helicasa anulación de una horquilla de ARN bajo tensión, la observación de RecBCD helicasa / nucleasa adelante y el movimiento hacia atrás, y T7 GP4helicasa mediada por la apertura de una replicación del ADN sintético tenedor. A continuación, discutir los experimentos en dos dsDNA translocases: el motor RuvAB estudiado en su sustrato natural, el cruce Holliday, y la segregación de cromosomas-FtsK motor, poniendo de manifiesto su inusual de acoplamiento al ADN superenrollamiento.
 La curva de elasticidad (Figura 2] muestra un gran comportamientono lineal: por debajo del 5 PN, la fuerza se usa para enderezar la bobina a lo largo de la fluctuación de la fuerza eje. Por encima de 5 PN, la molécula se extiende como una ordinaria de primavera y experimenta una transición hacia una nueva estructura a la insuficiencia de los 65 PN (37].
En contraste con dsDNA, ssDNA es mucho más flexible de polímero, la creación de una mucho más aleatoriabobina de configuración que conduce a una fuerte interacción intramolecular; además, ssDNA presenta unpaired bases, lo que puede obligar tanto a nivel local, para crear pelo, o con las regiones distales, creando complejo de orden superior estructuras. En consecuencia, a una fuerza bajo ssDNA contiene numerosas débil intramolecular bonos, y forma una pequeña bobina con un período muy corto de extremo aextremo de extensión (37]. Es interesante señalar que esta base intramolecular emparejamiento tiene la consecuencia de que dos moléculas ssDNA con idénticas longitudes de contorno, pero secuencias diferentes, por lo general tienen diferentes baja elasticidad de las curvas de fuerza (38]. En el límite opuesto, donde se extiende la fuerza es lo suficientemente fuerte como para alterar la base desincronización, ssDNA se extiende considerablemente más que su doble hundidos más rígida homólogo, posiblemente el doble. Ambos ss-dsDNA y tienen la misma extensión en una fuerza de alrededor de 5 PN.El ADN se presenta como un ovillo. Para tirar de él se une a alas dos bolitas como se muestra en la Fig. Al tirar del ADN, primero se estira y luego aumenta su longitud como cualquier hilo hastaalcanzar una fuerza de 65 pN. Su módulo de Young es de 300 MPa. Por encima de 65 pN, el ADN sufre una transición en donde su longitud aumenta un factor 1.7 sin que la fuerza aplicada se modifique. Seguidamente y para fuerzas superiores a 150 pN, el ADN se separa en sus dos hebras.

MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA
El Microscopio de Fuerza Atómica (MFA) es un instrumento mecano-óptico capaz de...