trabajo de investigacion

Mol Biochem Parasitol. 2014 octubre 11. pii: S0166-6851 (14) 00140-6. doi: 10.1016 / j.molbiopara.2014.10.001. [Epub ahead of print]
La interferencia de ARN en Fasciola hepatica juveniles reciénexcysted: Long dsRNA induce silenciamiento más persistente que siRNA.
Dell'Oca N1, Basika T2, Corvo I3, Castillo E4, Brindley PJ5, Rinaldi G6, Tort JF7.
datos del autor
Resumen
En trematodosinterferencia de ARN es la herramienta de elección para el análisis funcional de genes desde los enfoques de genética inversa clásicas permanecen disponible. Considerando que este enfoque ha sidooptimizado en esquistosomas, unos informes están disponibles para otros trematodos, probablemente refleja las dificultades para el establecimiento de la tecnología. Aquí se estandarizó condiciones para laRNAi en el hígado fluke Fasciola hepatica, el agente causante de la fasciolosis, una de las infecciones más problemáticas que afectan al ganado en todo el mundo. Dirigidas a un gen de copia única, quecodifica la leucina aminopeptidasa (LAP) como un modelo, hemos refinado condiciones de entrega que identifican electro-remojo, es decir, la electroporación y la posterior incubación tan eficiente parala introducción de pequeños RNAs en el golpe de suerte. Derribar de LAP se logró con tan poco como / concentraciones dsRNA ml 2.5μg, que pueden reducir u obviar efectos fuera de la meta. Sin embargo,a estas concentraciones, la incorporación de seguimiento por el marcaje fluorescente era difícil. Mientras tanto a largo dsRNA y ARN corto de interferencia (ARNsi) son igualmente eficaces en lainducción de un corto plazo golpe silenciamiento persistente abajo, dsRNA induce hasta 21 días después del tratamiento, lo que sugiere que los mecanismos de amplificación de la señal de interferenciapueden estar presentes en este patógeno. Silenciamiento persistente de la etapa invasiva para un máximo de 3 semanas (cerca de lo que se necesita para el golpe de suerte para llegar al hígado) abre la...