Trabajo Electroforesis


UNIVERSIDAD SIMON BOLIVAR
PROGRAMA DE MEDICINA
LAB. BIOLOGIA MOLECULAR
3C




ELECTROFORESIS



PRESENTADO POR:

ARRIETA DE AVILA KARLA
FUENMAYOR LACIDES
ROCHA REALES ANGIE



AL DOCENTE ENCARGADO DE LA ASIGNATURA:

DIANA CAVANZO ROJAS


BARRANQUILLA-COLOMBIA
2015

ELECTROFORESIS

La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con lafinalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.
Fue empleado por primera vez por  en el año 1937, pero su importancia vino a incrementarse cuando en los años cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K. Tiselius , impulsaron la electroforesis de zona, nombre que se asigno a la separación de materiales en un campo eléctrico en presencia de algún tipo desoporte; aunque este termino se limito originalmente al análisis de coloides y partículas submicroscopicas , se ha convertido en estos últimos años en una metodología aplicada a sustancias de bajo peso molecular. Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas  en un campo eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejandotranscurrir  cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas negativamente se descargaran hacia el ánodo (el polo positivo).
El movimiento de las moléculas esta gobernado también por dos fuerzas adicionales; inicialmente la fricción con el solvente dificultará  este movimiento originando una fuerza que se opone , por otro lado  lasmoléculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen energía  cinética propia denominado  difusión.  La energía cinética de las moléculas aumenta con la temperatura, por ello a mayor temperatura mayor difusión. La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no migren de una manera homogénea, de tal manera que, si las moléculas son colocadas en uncierto lugar de solución, los iones comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo. Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las moléculas empleando un medio que oponga mas resistencia a dicho movimiento. Una forma común de hacer esto es formar un gel. El gel consiste de un polímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas deagua y forma un tamiz  que dificulta el movimiento de los solutos, consecuentemente, la migración electroforética de las moléculas será mas lenta, pero el ensanchamiento del frente se vera reducido también.





TECNICAS DE ELECTROFORESIS

1. LIMITE MOVIL: propuesta por Picton y Linde en 1892, pero fue completamente desarrollada por Tiselius en 1930. En este método la muestra se coloca en unasolución buffer en un tubo con forma de u. Se aplica un campo eléctrico por medio de electrodos sumergidos en cada extremo del tubo. Las partículas de la muestra pueden entonces migrar en relación al campo eléctrico. Este método usa solamente la carga de la partícula y el potencial z resultante cuando la muestra se encuentra en contacto con el buffer. La dirección y velocidad de migración estadeterminada por la movilidad electroforética de cada componente. Una desventaja de este método es que la mayoría de los componentes no se separan limpiamente sino que se superponen. Solo los componentes mas rápidos y los mas lentos pueden ser parcialmente purificados. Otra desventaja es que los limites móviles de los componentes de la mezcla no son visibles al ojo humano y se necesita de un buen equipoóptico para la detección.

2. ELECTROFORESIS DE ZONA: parecido al del limite móvil con la diferencia de que cada componente migra de acuerdo con su propia movilidad. Se realiza sobre un medio de soporte para lograr la completa separación de cada componente, la muestra es aplicada en una banda angosta o de zona rodeados por buffer. Al aplicarse el campo eléctrico y los componentes migrar según su...