Trabajo HPLC

Cromatografía liquida de alta performance (HPLC)

Introducción:
La cromatografía liquida de alta eficacia o High Performance Liquid Chromatography (HPLC) es una técnica escogida para el aislamientoy purificación de productos de valor en las industrias químicas y farmacéuticas así como en la biotecnología y bioquímica.
Ha evolucionado enormemente en los últimos años, principalmente a partir dela década de los setenta, con lo que, inicialmente concebida como método de separación, ha llegado a convertirse en una fuente inagotable de métodos de analito. Pocos métodos de análisis químico sontan específicos para un análisis en particular, ya que tanto las fases previas de extracción como los procedimientos cromatográficos son llevados a cabo en función del tipo de molécula
A diferencia dela cromatografía de gases, la cromatografía (HPLC) no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.
La elección de un sistema de separación particular depende de lanaturaleza de las sustancias que van a separarse.

Clase de Sustancia
Método de separación
Lipofílicas, compuestos orgánicos neutros con peso molecular < 2000
Adsorción normal
Hidrofílicas, compuestosorgánicos polares, hidrocarburos saturados con P.M. < 5000
Adsorción de fase reversa
Compuestos orgánicos moderadamente polares
Partición (Líquido-Líquido)
Ácidos, Bases , Zwitteriones, de P.M. < 10000Intercambio Iónico
Separación por tamaño molecular de cualquier tipo de compuesto
Permeación sobre gel

La identificación de compuestos es la parte más importante de muchos trabajos en HPLC. Paraidentificar compuestos se debe seleccionar un sistema de detección que mida diferentes propiedades físico-químicas de la molécula. Para ello influye mucho el tipo de separación y la naturaleza de la detección,sea absorbancia, conductividad, fluorescencia, relación masa/carga, etc.

Instrumentización:
Columna:
Se encuentre diversos tipos de columnas secundarios, cada una con un rol específico:
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