Trabajo Práctico: Catálisis Enzimática

Cátedra: CATÁLISIS
Práctico Nº 1: Catálisis Enzimática
Introducción

La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]) es una hipérbola. Para determinargráficamente los valores de KM y Vmax es más sencillo utilizar la representación doble recíproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una línea recta. Esta representación doble recíproca recibe el nombre derepresentación de Lineweaver-Burk
Los inhibidores enzimáticos reversibles pueden ser clasificados como competitivos, acompetitivos, no competitivos y mixtos, según el efecto que produzcan en lasconstantes cinéticas Km y Vmax. Este efecto dependerá de que el inhibidor se una a la enzima E, al complejo enzima-sustrato ES o a ambos, como se puede observar en la figura de la derecha y en la tablainferior. Para clasificar correctamente un inhibidor pueden llevarse a cabo estudios de su cinética enzimática en función de la concentración de inhibidor. Los cuatro tipos de inhibición dan lugar adiagramas de Lineweaver-Burke y de Eadie-Hofstee que varían de diferente forma con la concentración de inhibidor. Para abreviar, se usan dos símbolos:
      y      
donde Ki y K'i son lasconstantes de disociación para unirse a la enzima y al complejo enzima-sustrato, respectivamente. En presencia de un inhibidor reversible, los valores aparentes de la Km y la Vmax pasan a ser (α/α')Km y(1/α')Vmax, respectivamente, como se puede apreciar en la tabla inferior para los casos más comunes.



Tipo de inhibición
Km aparente
Vmax aparente
solo Ki
()
competitiva


solo Ki'
()acompetitiva


Ki = Ki'
()
no competitiva


Ki ≠ Ki'
()
mixta


Los ajustes por regresión no lineal de los datos de cinética enzimática pueden proporcionar estimaciones muy precisas de lasconstantes de disociación Ki y Ki'.

Problemas:

Problema N°1:
¿Qué relación numérica existe entre Km y [S] cuando una reacción catalizada enzimáticamente alcanza el 80% de la Vmax?...