Trabajo práctico N 3 Cromatografía

Química Orgánica (63.14) 

 
 
Trabajo Práctico N°:​
 3 
Turno N°2 
Docentes a cargo:​
 De la Horra, Pozzoli 
Armario N°:​
 12  
Integrantes: 
 
Apellido 

Nombre 

Padrón 

Erausquin 

Carolina 

96837 

Salemme 

Ailén 

96966 

 
Revisión:​
 A 
         ​
Fecha:​
 07/04/2015 
Firma corrector:   

 

 

1

ÍNDICE 
 
OBJETIVOS

3 

EXPERIENCIAS

3 

Experiencia n°1

3 

Materiales

3 Procedimiento

4 

Diagrama de flujo

5 

Resultados

6 

Experiencia n°2

8 

Materiales

8 

Procedimiento

8 

Diagrama de flujo

9 

Resultados

10 

CONCLUSIONES

 

10 

 

2

OBJETIVOS 
● Incorporar  los  conceptos  teóricos  en  los  que  se  fundamenta  la 

cromatografía en sus distintos tipos. 
● Ejemplificar  la  utilidad  de  las  técnicas cromatográficas como método  de separación y como criterio de pureza e identificación. 
● Aplicar  las  técnicas  de  capa   delgada  y  columna  para  la  separación  de  

pigmentos  vegetales  (adsorción)  y  papel  para   la  separación  de 
colorantes alimentarios (partición). 

 
EXPERIENCIAS 
Experiencia nº1: Aplicación de la cromatografía de
adsorción

para

la

separación

de

pigmentos

vegetales
Materiales 
● 20 g de hojas de acelga 
●Solventes: éter de petróleo, acetato de etilo, acetona, etanol 
● NaCl​
 0.1% 
sc​
● Mortero 
● Tubos de hemólisis 
● Tubos de ensayo 
● Soporte universal 
● Agarradera 
● Pinza de madera 
● Columna de vidrio 
3

● Algodón 
● Perita  
● Embudo de vidrio 
● Pipeta 
● Probeta 
● Pipeta Pasteur 
● Placas de sílica 
● Vaso de precipitados 
● Vidrio de reloj 

 
Procedimiento 
Para  obtener  los  extractos  de  las  hojas  verdes  se  cortaron  20  g  de  hojas  de 
acelga  y  se  las  colocó en un  mortero. Se  agregaron  20  ml  de acetato  de  etilo, 
se las  dejó macerar  alrededor de 5 minutos y se  exprimió. Se filtró y se recogió 
en una  ampolla de decantación, en donde se agregaron 10 ml de NaCl al 0,1%. 
Luego se separan las fases, y se seca el  extracto obtenido con Na​
SO​
2​4 anhidro. 
Esta etapa de la experiencia se realizó en común con otros dos grupos. 
Con  una  pequeña  muestra  del  extracto  se  determinó  la  cantidad  de 
componentes  que tiene  mediante  una  cromatografía en  capa  delgada: dos (los 
carotenos  y  la  clorofila).  Dicha  cromatografía  se  realizó  tres  veces,  cada  vez 
con distintos  solventes: el  primero, éter  de petróleo:acetato de etilo (7:3), luego 
éter de petróleo:acetona (9:1), y por último, éter de petróleo:acetona (8:2). 
El  siguiente  paso  fue  la cromatografía  en  columna de  una muestra del extracto 
vegetal.  El  solvente  inicial  fue  éter  de  petróleo:acetona  (9:1),  luego  la  misma 
mezcla  pero  con   distinta  proporción  (8:2).  Esta  mezcla se eligió  a  través de  la 
cromatografía  en   capa  delgada realizada  previamente,  si  bien  no  se  utilizó  el 
mismo, se  determinó que  lo más apropiado era usar primero un solvente, en su 
mayoría  éter,  ya que  con  este  se  logra separar  los carotenos,  por  la afinidad 
4

de sus estructuras no polares, y luego agregar una parte más de solvente polar, 
ya  que  la  clorofila  tiene  una  estructura  con   esa  característica  y  así puede  ser  obtenida. 
Finalmente,  se  realizó  una  última  cromatografía  en   capa  delgada  para 
comparar  las  relaciones  de  frente  de  los  carotenos,  la  clorofila,  y  el  extracto 
vegetal. 

 
Diagrama de flujo 

 

5

 

 

 
Resultados 
A continuación, se muestran los resultados de las sucesivas CCD, con el 
extracto como siembra, que se realizaron para elegir el solvente o mezcla de solventes más adecuados para realizar la cromatografía en columna y así 
obtener los distintos pigmentos mediante esta técnica:  

6

ÉTER DE 
PETRÓLEO: 
ACETONA 

PIGMENTO 

FRENTE DE 
SOLVENTE 
(cm) 

FRENTE DE LA 
MUESTRA 
(cm) 

Rf 

Carotenos 

0,1 

5 

0,02 

Clorofila 

0,1 

5 

0,02 

 
8:2 

Carotenos 

4,1 

1 

0,244 

Clorofila 

4,1 

0,75 

0,183 

 
7:3 

Carotenos 

4,7 ...