TRABAJO PRACTICO N° 5 ORGANIZACIÓN SUBCELULAR LABORATORIO BIOLOGIA CELULAR

TRABAJO PRACTICO N° 5
ORGANIZACIÓN SUBCELULAR




















INTRODUCCIÓN

Las células se generaron sobre la Tierra hace 3,5 billones de años. Estas células iniciales eran relativamente primitivas,denominadas actualmente como procariontes. Posterior a esto aparecieron las células eucariontes, éstas presentaban una organización compleja y eran de un tamaño mayor a las iniciales (procariontes), éstas células parte de animales y plantas, “siendo éstas enormes ciudades pluricelulares agrupadas realizan funciones específicas y se relacionan mediante elaborados sistemas de comunicación” (1).
“Pordefinición y a diferencia de las células procariontes, las células eucariontes poseen un núcleo que contiene la mayoría del DNA envuelto en una membrana” (2). Esto nos indica que el material genético se encuentra en un sitio aparte del denominado citoplasma, en el cual se distinguen componentes esenciales de la célula como cloroplastos (en el caso de las plantas), mitocondrias, retículosendoplasmáticos, aparato de Golgi, ribosomas, peroxisomas, lisosomas, citoesqueleto, organélos fundamentales en su existencia.
Cada organelo cumple un rol diferente e importante, es decir, la mitocondria que está compuesta de una bicapa y crestas, y está encargada de la respiración celular y también es la fuente energética de la célula, y posee ADN propio; el aparato de Golgi, que es un complejo que recibe,empaqueta y distribuye proteínas a diversos lugares intracelular y extracelulares; los peroxisomas están encargados de la desintoxicación de moléculas dañinas utilizando peróxido de hidrógeno; el cloroplasto es exclusivo de las plantas y le da su característico color verde, y le permite hacer la fotosíntesis, tiene origen bacteriano y ADN propio; el citoesqueleto es el esqueleto de la célula, lepermite aumentar o modificarse a voluntad, es flexible, está compuesto por microtúbulos, microfilamentos y filamentos de actina; el retículo endoplasmáticos es una gran membrana plegada, cerca del núcleo celular, se divide en retículo endoplasmático liso, que procesa lípido, y retículo endoplasmático rugoso, que procesa proteínas y posee mitocondrias; los lisosomas son sacos de enzimas hidrolíticasque desintoxican a la célula de organismos patógenos; la membrana plasmática, que es la capa externa de la célula (bicapa lipídica), sirve para controlar el ingreso como la salida de moléculas de la célula; el núcleo posee el material genético celular y está protegido por una membrana nuclear.
El fraccionamiento subcelular es una técnica de separación de célula, en los diferentes organélos ymacromoléculas que lo constituyen. A su vez ésta metodología aísla los componentes celulares en grandes cantidades y con un alto grado de pureza. Dentro de ésta técnica encontramos la centrifugación, método esencial en el procedimiento experimental.
En éste práctico nos enfocaremos en la obtención de organélos, mediante la técnica de fraccionamiento celular, así como de reconocimiento de organelosmediante tinciones y reacciones.

OBJETIVOS
Conocer técnicas de homogenización usadas en fraccionamiento subcelular
Comprender los fundamentos de la técnica de centrifugación usada en el fraccionamiento subcelular.
Comprender el concepto de moléculas marcadoras y su utilidad en la evaluación de fraccionamiento subcelular.MATERIALES Y MÉTODOS

El primer experimento a realizar es la homogenización, para esto recibimos de parte de nuestro profesor un homogenizado filtrado de hígado de rata. El homogenizado se obtuvo a partir de una muestra de hígado de rata dejado en 50 ml de IBc frio en un vaso de precipitado, utilizamos el homogeneizador sobre nuestro hígado, utilizamos un embudo y gasa ara filtrar la muestra,...