trabajo

PRACTICA
Detección y cuantificación de ácido indolacético (AIA) producido in vitro

INTRODUCCION
El abuso de productos fertilizantes para aumentar la productividad de las pasturas, ha ocasionado un desequilibrio de la microbiota nativa que cumple con funciones importantes provocando bajos rendimientos y aumento en los costos para el agricultor y el ganadero. Una alternativa parapromover el crecimiento rápido de raíces y tallos es el uso de inoculantes microbianos (biofertilizantes) que contribuyen a la recuperación de las poblaciones existentes en el suelo y con ello a mejorar la fertilidad de los mismos.
Entre los microorganismos, las bacterias tienen especial importancia en la relación suelo-planta y son responsables del incremento o disminución en el suministro denutrientes como también en la producción de factores de crecimiento (fitohormonas); las bacterias pertenecientes a los géneros: Azotobacter sp, Azospirillum sp, Pseudomonas sp, Xantomonas sp, Enterobacter sp, Arthrobacter sp, Bacillus subtilis, se destacan por su potencial como biofertilizantes debido a que son capaces de producir sustancias promotoras de crecimiento vegetal, que incidengrandemente en el rendimiento y en la calidad de los cultivos .
Los estudios realizados con microorganismos de los géneros Azospirillum sp y Azotobacter sp han demostrado que estas poblaciones además de fijar nitrógeno en forma asimbiótica, también segregan sustancias promotoras del crecimiento (auxinas, giberelinas, citoquininas), las cuales benefician a la planta de una forma multidimensional . Lashormonas promotoras del crecimiento vegetal, como lo es la auxina: ácido Indol Acético (AIA) induce la deformación y el aumento de pelos radiculares, logrando con esto una mayor captación de nutrientes y promoviendo en consecuencia el crecimiento y rendimiento de los cultivos .
Se ha establecido que las rizobacterias promotoras del desarrollo vegetal (plant-growth promoting rhizobacteria,PGPR), juegan un papel primordial en los cultivos permitiendo disminuir la utilización de fertilizantes químicos, aumentar el rendimiento, acortar ciclos y por consiguiente, reducir la contaminación ambiental.
Las bacterias representan una alternativa para mejorar el aporte nutricional de las plantas; dentro de los efectos benéficos se destacan la secreción de reguladores de crecimiento deplantas como auxinas mejorando los procesos de germinación de semillas, nutrición, desarrollo de raíces etc. En este sentido el objetivo del presente trabajo fue evaluar la producción AIA a partir de aislados de los géneros Azotobacter sp y Azospirillum sp nativos para hallar cepas eficientes en la producción de la fitohormona, que posteriormente podrán ser utilizados como biofertilizantes paramejorar la productividad de los pastos.
OBJETIVOS
evaluar la producción AIA
cuantificar el acido indolacetico producido

PROCEDIMIENTO
Para la detección y cuantificación de ácido indolacético producido in vitro según la reacción colorimétrica de Salkowski descrita por Mantilla (2007) y García y muñoz (2009), cada bacteria nativa será cultivada en caldo nutritivo por 24 horas, de donde setomarán 0,6 mL para inocularlos en 5 mL de caldo tripticasa soya suplementado con triptófano (Anexo 2). Después de la incubación a 30 ºC, por 72 horas en agitación constante (150 rpm), los cultivos serán centrifugados a 3000 rpm, durante 3 minutos. A continuación, 0,4 mL de cada uno de los sobrenadantes se depositarán en tubos, se agregarán 1,6 mL del reactivo de Salkowski modificado (Anexo 3) enuna relación 1:4, se mezclarán y se dejarán en reposo durante 30 minutos en oscuridad. La positividad a la producción de ácido indolacético estará dada por la aparición de una coloración grosella (Figura 3), y se leerá la absorbancia en espectrofotómetro de luz visible a 530 nm. Las concentraciones se calcularán en una recta patrón que se obtendrá con diluciones sucesivas de una solución de 100...