Trabajos Fáciles

Técnica de ELISA (Enzyme Linked Inmuno Sorbent Assay)

La técnica de ELISA (Enzyme Linked Inmuno Sorbent Assay) es un procedimiento de ensayo inmunoenzimático. Se basa en la detección antígeno (Ag)o anticuerpo (Ac), inmovilizado sobre una fase sólida y mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción, la prueba recurre al empleo de inmunógenos, haptenos ó anticuerposmarcados con una enzima cuyo producto colorido, puede ser medido espectrofotométricamente. Este principio tiene las propiedades de un inmunoensayo ideal: es versátil, robusto, simple en su realización,emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fase sólida, de una separación fácil entre la fracción retenida y la fracción libre. Las enzimas utilizadas se muestran en el cuadro 1.Fases de realización de una ELISA
 Sensibilización de la placa.
 Bloqueo de espacios vacíos.
 El Ag o el Ac se fija a una superficie.
 Aplicación del espécimen de prueba.
Controlespositivo y negativo
 Detección y caracterización por Ac. 2° marcado.
 Incubación con la muestra.
 Incubación con el sistema de detección.
 Adición del sustrato.

Los diferentes tipos deELISA son los que se enumeran a continuación:

Anticuerpos Marcados
 ELISA Directo
 ELISA Indirecto
 ELISA Sandwich
o Doble (DAS)
o Heterologo (HADAS)

Antígenos Marcados
ELISACompetitivo

ELISA Directo. Consta de las siguientes etapas: Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o nofijados. Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerposmarcados que no hayan reaccionado. Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea. Lectura visual o colorimétrica del producto final...