Trabajos

DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO

I.- Procedimiento: Medio de cultivo y suspensión bacteriana: Prepare el medio de cultivo PY ca++ , de acuerdo a la siguiente tabla de componentes:

Material necesario:Para la suspensión bacteriana:
• 2 matraz Erlenmeyer de 250 ml.
• 1 probeta graduada de 100 ml
• 1 espátula
• Papel aluminio
• Tapones de algodón
• Masking tape
• 10 cajas Petri desechablessencillas

Reactivos:
• Peptona de caseína
• Extracto de levadura
• Agar bacteriológico
• CaCl2


Medio sólido PY en cajas para 100 ml.
INGREDIENTES CANTIDAD (g)
Extracto de levadura 0.3Peptona de caseína 0.5
Agar bacteriológico 1.5
Agua destilada a pH 7 100 ml
Disolver y calentar perfectamente el medio. Esterilizar en autoclave a 120° C/ 15 min. Enfriar el medio y adicionar 1ml de CaCl2 al 0.7 M, previamente esterilizado con la ayuda de una micropipeta en la campana de flujo laminar. Llenar las cajas de Petri y esperar la gelificación.Caldo PY-calcio, para 100 ml de medio.
INGREDIENTES CANTIDAD (g)
Extracto de levadura 0.3
Peptona de caseína 0.5
Nota: Este medio se utiliza para la producción de inoculo.También debe agregarse 1.0 ml de CaCl2 al 0.7 M previamente esterilizado.






II. Protocolo de Extracción de ADN bacteriano.

Para este fin se utilizara el kit de aislamiento de ADN marcaAmershan Biosciences®: el cual cuenta con los siguientes reactivos:

a) Solución de lisis
b) RNAsa
c) Solución para precipitar proteínas
d) Solución de hidratación de ADN
e) Alcohol etílico al70 %
f) Isopropanol al 100 %.
g) Hielo

Asimismo, se requiere de los siguientes materiales y equipos:

• Tubos Eppendorff de 1.5 ml
• Gradilla para tubos Eppendorff
• Juego de micropipetas(1-10 µl, 20-200 µl , 100-1000 µl)
• Baño maría o termomixer
• Vortex
• Parrila de calentamiento
• Microcentrifuga (max: 13000 rpm)
• Termómetro (-10 a 120 oC
• Vaso de precipitado de 500 ml...