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El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de entero bacterias según:
1. Fermenten o no glucosa.
2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.
3. Produzcan o no ácido sulfhídrico.
4. Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:
1. Si la bacteria problemafermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecerá de color rojo.
2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuará de color rojo.
3. Si produceácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se presentará un ennegrecimiento del tubo. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.
4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria esproductora de gas.
AGAR LIA
AGAR DE HIERRO Y LISINA
(LIA)
USO
Para diferenciar enterobacterias en base a su capacidad de descarboxilar o desaminar la lisina y la producción de ácido sulfhídrico, especialmente del Género Salmonella (excepto Salmonella paratyphi A, que es lisina descarboxilasa negativa). Edwarsiella, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Serratia marcescens, seobserva la prueba positiva por arriba del 80%. Presentan prueba Negativa los Géneros Shigella, Citrobacter, Enterobacter cloacae y el grupo Proteus – Providencia.
PRINCIPIO
La peptona de gelatina funciona como soporte de crecimiento, el extracto de levadura proporciona la fuente de vitaminas necesarias y la dextrosa es el carbohidrato fermentable.
En este medio se observa la fermentación deglucosa, producción de ácido sulfhídrico, la descarboxilación y desaminación de la lisina. Los microorganismos que tienen la enzima descarboxilasa, descarboxilan el aminoácido lisina a cadaverina (amina primaria, liberando CO2), debido a la alcalinidad, el pH se modifica con los siguientes resultados: La prueba se considera POSITIVA si la coloración en el fondo se observa morada ovioleta-púrpura. NEGATIVA si la coloración en el fondo es amarilla y la superficie permanece del color del medio, ya que solo hay fermentación de glucosa. La desaminación de la lisina a ácido alfa cetocarbónico, forma compuestos pardo-rojizos en el pico de flauta del medio con la sal de hierro y por la acción del oxígeno. La formación de ácido sulfhídrico se observa por una coloración negra debida al sulfuro dehierro producido.
Las colonias seleccionadas se inoculan estriando el agar inclinado (pico de flauta) y con doble picadura en el centro sin tocar el fondo del medio. Incubar 18 – 24 h a 35ºC.
SIMMONS CITRATO AGAR
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
Siembra
A partir de uncultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inóculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.
Incubación
A 35-37 ºC, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 días de incubación.
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollobacteriano y no hay cambio de color.
Limitaciones
-Si se usa un inóculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo-amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualización azul de un resultado positivo.
-Inóculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se...
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