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Sensible y Específico Prueba Hodge modificada para KPC y metalo-beta-lactamasas de Detección en Pseudomonas aeruginosa por uso de una cepa de Novela Indicador, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Se evaluó la capacidad de la prueba de Hodge modificado para discriminar entre KPC-y metalo-beta-lactamasa (MBL) productoras de Pseudomonas aeruginosa aísla y no productorescarbapenemasas. Con Escherichia coliATCC 25922 como la cepa indicadora, la MHT resultó en una baja sensibilidad, especificidad, y repetibilidad.Sustitución de la cepa indicadora con Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 condujo a un rendimiento mejorado (100%, 97%, 0%, y 100% de sensibilidad, especificidad, los resultados indeterminados y repetibilidad, respectivamente).
La detección de los productores carbapenemasas en ellaboratorio clínico es de gran importancia para la determinación de los regímenes terapéuticos apropiados y la aplicación de medidas de control de infecciones ( 1 ,5 ). La prueba de Hodge modificada (MHT) ha sido ampliamente utilizado para el cribado de carbapenemasas por laboratorios de rutina porque analiza directamente la actividad carbapenemasas de una cepa ensayada.Debido a su simplicidad, el CLSIpublicó una recomendación de que Enterobacteriaceae con CIM de carbapenem elevadas o zonas de inhibición de difusión en disco reducido se probó para la producción de carbapenemasas por medio de la MHT ( 2 ). Sin embargo, esta recomendación no incluye Pseudomonas aeruginosa , en el que adquirieron carbapenemasas están surgiendo cada vez con mayor prevalencia. Sólo dos informes dirigidos a lautilidad del uso de MHT P. aeruginosa aislados de genotipo conocido como el patrón oro ( 4 , 6 ). El uso de la estandarización metodológica para enterobacterias , se informó de que la formación de césped fondo por E. coli ATCC 25922 fue inhibida por una gran proporción de las cepas probadas, definidos como un resultado equívoco o indeterminado ( 6 ​​). Resultados similares fueron descritos en el informede Lee et al. ( 4 ). Es claro, entonces, que el tradicional MHT necesita ser redefinido para uso en Pseudomonas aeruginosa , con las condiciones de ensayo óptimas definidas para garantizar un rendimiento superior.
Por otro lado, varias pruebas basadas en inhibidores de se han desarrollado para la detección de carbapenemasas en P. aeruginosa ( 5 , 6 ). Sin embargo, misdetection de los aislados dereciente aparición con una combinación de carbapenemasas ( 3 ) podría ocurrir con estos métodos. Por lo tanto, se necesitan otros métodos fenotípicos tales como la MHT para complementar estas pruebas basadas en el inhibidor.
Aquí hemos optimizado el MHT para una detección más precisa y fiable de la producción carbapenemasas en P.aeruginosa mediante el uso de una nueva cepaindicadora, K. pneumoniae ATCC 700603, y nombró a esta prueba, el P. aeruginosa MHT (PAE-MHT).
Selección de la cepa indicadora óptima La principal limitación de la MHT para el cribado carbapenemasas en P. aeruginosa fue la inhibición del crecimiento de la cepa indicadora por el aislado clínico probado. Por lo tanto, primero evaluó el desempeño de cinco cepas indicadoras putativos: Staphylococcus aureus ATCC25923,Enterococcus faecalis ATCC 29212, E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC 27853, y Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. Para este propósito, la MHT se desafiaron con un panel de 64 P. aeruginosacepas: 42 productores carbapenemasas [KPC ( n = 20),-como VIM ( n = 6), IMP-13 ( n = 3), VIM-11 ( n = 3), SPM-1 ( n = 3), VIM-2 ( n = 3), IMP-16 ( n = 2), e IMP-como ( n = 2)] y 22 no productores carbapenemasas. Lascepas se habían caracterizado como parte de un trabajo previo ( 6 ​​). Los aislamientos procedían de fuentes clínicas, y no había una sola cepa de cada paciente. El MHT se realizó como se ha descrito previamente ( 2 , 4 ). En resumen, una dilución 1/10 de un inóculo de los organismos indicadores, se ajustó a un patrón de turbidez McFarland 0,5, se utilizó para inocular las superficies de...