Trangenesis-Clonacion

Agrobiotecnología
Curso 2011

Clonación y transgénesis animal
Lino Barañao

Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires

Sumario
Clonación

Clonación en distintas especies

Animales transgénicos

Recombinación homóloga

Aplicaciones
Agrobiotecnología
Animales transgénicos

ReferenciasClonación

Agrobiotecnología
Animales transgénicos

La clonación consiste en la producción de individuos genéticamente idénticos

• En los animales, la clonación se basa en el uso de la técnica de transplante nuclear. • Mediante esta técnica, una célula donante . del individuo a clonar se transfiere a un . ovocito previamente enucleado.
célula donante ovocito embrión sintéticoAgrobiotecnología
Animales transgénicos

Enucleación

Electrofusión

TRANSPLANTE NUCLEAR

Células embrionarias (totipotenciales) Nuevo individuo

X

Células diferenciadas La diferenciación es un proceso irreversible asociado a la pérdida de La diferenciación es un proceso irreversible asociado a la pérdida de totipotencialidad. Sólamente las células embrionarias tienen la totipotencialidad.Sólamente las células embrionarias tienen la potencialidad de generar un organismo completo. De ahí el estatus potencialidad de generar un organismo completo. De ahí el estatus único del embrión. único del embrión.

Dolly fue clonada a partir de una célula de glándula mamaria, Dolly fue clonada a partir de una célula de glándula mamaria, demostrando que aún las células somáticas diferenciadasdemostrando que aún las células somáticas diferenciadas pueden ser totipotenciales. pueden ser totipotenciales.

La diferenciación celular sería la consecuencia de la unión reversible de factores de transcripción tejidoespecíficos que regulan la expresión de un grupo particular de genes.

Embrión

Célula somática

Corolario: La “potencialidad” para dar un nuevo Corolario: La “potencialidad” paradar un nuevo individuo no es privativa del núcleo de las células individuo no es privativa del núcleo de las células embrionarias embrionarias

Reprogramación: Los factores de transcripción originalmente presentes en la célula donante se diluyen y son reemplazados por aquellos presentes en el oocito

• ¿Cuáles son las aplicaciones de la clonación animal?

Clonación reproductiva debovinos
Para la clonación de bovinos suele partirse de células fetales como donantes del material genético. Los ovocitos pueden provenir de animales sacrificados para consumo ya que sólo aportan el ADN mitocondrial. El embrión obtenido en cultivo debe ser luego transferido a una hembra receptora para completar su desarrollo.

Células donantes
• Células adultas • Células fetales

- La vida mediaes de 20 divisiones celulares. - La tasa de divisiones de 0,8 divisiones por día. - Son muy sensibles a la inhibición por contacto. - Se desarrollan en menor proporción.

- La vida media es de 35 divisiones celulares. Ello permite su manipulación genética. - La tasa de divisiones de 1,3 divisiones por día. - Son muy sensibles a la inhibición por contacto. - Se desarrollan en mayor proporción.cortar el tejido

explanto

Ovocito recipiente

24 hs

Expansión de las células del cúmulus

OVOCITOS INMADUROS
Primer cuerpo polar

OVOCITOS MADUROS • Los ovocitos obtenidos de ovarios de animales sacrificados para consumo deben ser madurados in vitro. • La maduración consiste en el avance de la división meiótica hasta la metafase II. • En este estadío se observa la extrusión delprimer cuerpo polar.

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Animales transgénicos

Transplante nuclear

Para implementar la técnica de transplante nuclear se requiere disponer de micromanipuladores y de un microscopio con accesorios para visualizar fluorescencia.

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Animales transgénicos
Gentileza de Biosidus S.A.

Transplante nuclear
Gentileza de Biosidus S.A.

Ovocito en MII...