Trans-splicing alternativo de los exones constantes y variables en el gen de migración de axón en Drosophila (lola)
Páginas: 2 (482 palabras)
Publicado: 23 de abril de 2013
Trans-splicing alternativo de los exones constantes y variables en el gen de migración
de axón en Drosophila (lola). Takayuki Horiuchi, Edward Giniger y Toshiro Aigaki.
Para caracterizar a lola eneste trabajo se hicieron los siguientes experimentos:
-Estudio de complementación interalélica: Entre 5 alelos mutantes de lola obtenidos
con EMS: ORE120 y ORC46 para la región constante así comoORC4 y ORE50 para la
variable 21-22 (V21-22) y ORE119 para el exón V23. En homocigosis eran letales y en
heterocigosis sólo eran viables moscas que combinaban mutaciones entre regiones
variables yconstantes, así como las mutantes en V21-23. Se concluyó que los ARNm
funcionales se obtenían por trans-splicing entre pre-ARNm ya que además de existir
ARNm WT en moscas mutantes heterocigotasestos no se debían a reversiones génicas
y que los sitios de splicing permitían unión invariable de exones. La primera
demostración de trans-splicing alternativo entre exones de una misma hebra.-Frecuencia de Trans-splicing interalélico: Usando las cepas Oregon (OR), yellow white
(YW) y Shangai 83K-6 (83K) y dianas para las enzimas FspI y BstZ17I como marcadores,
se digirieron cDNA de laisoforma T (C5-8/V32) de OR,YW y su F1. En la electroforesis
se observaron bandas de ARNm interalélicos híbridos en la F1. Por lo que el transsplicing debía ocurrir en la unión de los exones constantesy variables. Para confirmarlo
se hizo PCR desde cDNA de las regiones C5-8/V10 y C5-8/V32 de híbridos OR/YW y C58/V23 y C5-8/V32 para 83K/YW. Se clonaron en vectores pGEM-T, se transformaronbacterias y secuenciaron los haplotipos, con lo que se vio que la isoforma B se
originaba por cis-splicing y que gran parte de las isoformas L y T lo hacían por transsplicing entre exones constantes yvariables.
-Influencia de los reordenamientos cromosómicos: Mediante análisis de SNPs de la F1
de cruces de OR, YW u 83K con moscas portadoras del cromosoma balanceado CKG30 o
del gen T(2;3)X3. Los...
de axón en Drosophila (lola). Takayuki Horiuchi, Edward Giniger y Toshiro Aigaki.
Para caracterizar a lola eneste trabajo se hicieron los siguientes experimentos:
-Estudio de complementación interalélica: Entre 5 alelos mutantes de lola obtenidos
con EMS: ORE120 y ORC46 para la región constante así comoORC4 y ORE50 para la
variable 21-22 (V21-22) y ORE119 para el exón V23. En homocigosis eran letales y en
heterocigosis sólo eran viables moscas que combinaban mutaciones entre regiones
variables yconstantes, así como las mutantes en V21-23. Se concluyó que los ARNm
funcionales se obtenían por trans-splicing entre pre-ARNm ya que además de existir
ARNm WT en moscas mutantes heterocigotasestos no se debían a reversiones génicas
y que los sitios de splicing permitían unión invariable de exones. La primera
demostración de trans-splicing alternativo entre exones de una misma hebra.-Frecuencia de Trans-splicing interalélico: Usando las cepas Oregon (OR), yellow white
(YW) y Shangai 83K-6 (83K) y dianas para las enzimas FspI y BstZ17I como marcadores,
se digirieron cDNA de laisoforma T (C5-8/V32) de OR,YW y su F1. En la electroforesis
se observaron bandas de ARNm interalélicos híbridos en la F1. Por lo que el transsplicing debía ocurrir en la unión de los exones constantesy variables. Para confirmarlo
se hizo PCR desde cDNA de las regiones C5-8/V10 y C5-8/V32 de híbridos OR/YW y C58/V23 y C5-8/V32 para 83K/YW. Se clonaron en vectores pGEM-T, se transformaronbacterias y secuenciaron los haplotipos, con lo que se vio que la isoforma B se
originaba por cis-splicing y que gran parte de las isoformas L y T lo hacían por transsplicing entre exones constantes yvariables.
-Influencia de los reordenamientos cromosómicos: Mediante análisis de SNPs de la F1
de cruces de OR, YW u 83K con moscas portadoras del cromosoma balanceado CKG30 o
del gen T(2;3)X3. Los...
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