Transcripcion De Procariotas
El “dogma central” de la biología molecular y el flujo de la información genética Transcripción Traducción
DNA Funciones del RNA
RNA
PROTEINA
a) Material genético: puede replicarse y retrotranscribirse a DNA. Ejemplos, virus del mosaico del tabaco y retrovirus. b) Funcional: RNA ribosómico (rRNA), transferente (tRNA) y otros. No se traducen y constituyenproductos finales de la expresión génica; regulatoria y catálisis. c) Informativa: RNA mensajero (mRNA). Se traduce a proteínas.
Moléculas de RNA en E.coli
Tipo RNA ribosómico (rRNA) RNA de transferencia (tRNA) RNA mensajero (mRNA) Cantidad relativa (%) 80 15 5 Coeficiente de sedimentación (S) 23 16 5 4 Masa (kDa) 1.2 x 103 0.55 x 103 3.6 x 101 2.5 x 101 Heterogéneo Número de nucleótidos 37001700 120 75
COMPARACION ENTRE REPLICACION Y TRANSCRIPCION SIMILITUDES FENOMENO PROCESIVO POLARIDAD 5’→ 3’ SE UTILIZA COMO MOLDE UNA CADENA DE DNA COMPLEMENTARIDAD DE BASES DIFERENCIAS REPLICACION ADN POLIMERASA dATP, dGTP, dCTP y dTTP TODO EL CROMOSOMA UNA RONDA POR CICLO DOS CADENAS CON CEBADOR ACTIVIDAD CORRECTORA TRANSCRIPCION ARN POLIMERASA ATP, GTP, CTP y UTP UNO O POCOS GENES VARIOS ARNPOR GEN EN CADA CICLO UNA CADENA SIN CEBADOR SIN ACTIVIDAD CORRECTORA
Reacción catalizada por la RNA polimerasa Los tres tipos de RNA celular en E.coli son sintetizados por la misma RNA polimerasa según las instrucciones dadas por un DNA molde.
REACCION GLOBAL RNA polimerasa (NMP)n + NTP RNA (NMP)n + 1 + PPi RNA alargado
La RNA polimerasa de E. coli requiere los siguientes componentes parala síntesis de RNA: 1) Un molde. Preferentemente es un DNA de doble cadena. También puede servir como molde un DNA monocatenario. 2) Precursores activados. Se requieren los cuatro nucleósidos trifosfato; ATP, GTP, CTP y UTP. 3) Un ión metálico divalente. Son eficaces el magnesio y el manganeso. La RNA polimerasa cataliza la iniciación y la elongación paso a paso de las cadenas de RNA.
Mecanismode la reacción catalizada por la RNA polimerasa
Composición de la RNA polimerasa Es un enzima con un peso molecular de unos 500 kDa formado por cinco clases de subunidades. La composición subunitaria del enzima completo, llamado holoenzima, es α2 β β’σ70 y ω. Subunidades de la RNA polimerasa de E. coli
Subunidad α β β’ σ70 ω Gen Rpo A Rpo B Rpo C Rpo D Número 2 1 1 1 1 Masa (kDa) 37 151 15570 11 Función Iniciación de la cadena, interacción con las proteínas reguladoras y elementos promotores corriente arriba Iniciación y elongación de la cadena, forma enlaces fosfodiéster Unión al DNA Reconoce al promotor e inicia la síntesis Desconocida
Diferentes Factores σ reconocen promotores con diferentes secuencias consenso Gen rpoD rpoH rpoN fliA Masa (kDa) 70 32 54 28 Uso General Choquetérmico Nitrógeno Flagelar Secuencia - 35 TTGACAT CCCTTGAA CTGGNA CTAAA Separación 16-18 pb 13-15 pb 6 pb 15 pb Secuencia - 10 TATAAT CCCGATNT TTGCA GCCGATAA
Funciones de la RNA polimerasa. a) Localiza en el DNA los centros de iniciación. b) Desenrrolla un tramo corto del DNA helicoidal para producir un molde de DNA de un solo filamento, del cuál tomara instrucciones. c) Selecciona unribonucleósido trifosfato correcto y cataliza la formación de un enlace fosfodiéster. d) Localiza las señales de terminación e) Interacciona con las proteínas activadoras y represoras que modulan la velocidad de transcripción.
Tecnica de “huellas dactilares” con DNasa I como herramienta para identificar los lugares del DNA que unen proteínas específicas.
Estudios del promotor
Promotor A3 de T7Promotor A3 de T7 - resistentes a la metilación - más vulnerables a la metilación - * purinas metiladas que interfieren con la unión - ◊ contactos de fosfatos
Las dos regiones conservadas están separadas por dos vueltas de hélice
Identificación de los residuos G que contactan con la RNA polimerasa en el promotor del triptófano de E. coli
La RNApolimerasa de E.coli unida al DNA. Por...
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