Transfección cultivo de tejidos animal
Páginas: 3 (656 palabras)
Publicado: 26 de agosto de 2012
Marco Teórico
En el contexto de cultivo de tejido animal, el término transfección implica en cambio en el fenotipo como resultado de asimilación de nuevo material genético. Existen diversastécnicas que permiten que fragmentos de DNA previamente clonados puedan ser transferidos a células huésped, tales como coprecipitación con fosfato de calcio, la electroporación, lipotransfección y lainfección retroviral.[1]
[pic]
Por lo general el procedimiento a seguir para transfectar células de mamífero es el siguiente: El fragmento de DNA a clonar se mantiene como un plásmidobacteriano. Muchas copias de plásmidos pueden obtenerse durante el crecimiento bacteriano. El DNA plasmídico es posteriormente purificado. Una vez que la secuencia de interés ha sido clonada, esta puede sermanipulada para asilar subclonas contenientes por ejemplo de secuencias promotoras. Al realizar manipulación genética, secuencias de promotor pueden ser ligadas a genes reporteros, tales como β –gal,cuales productos pueden ser rastreados fácilmente tras la transfección. Otro ejemplo de rastreo es mediante la proteína verde fluorescente (GFP), solo aquellas células vivas transfectadas de maneraexitosa podrán ser localizadas al momento de ser irradiadas con luz UV en un microscopio invertido.
Las transfecciones pueden ser transitorias o estables. Las transfecciones transitorias son de cortoplazo y se utilizan poco después de la transfección y su la eficiencia de transfección puede ser determinada por medio de ensayos relacionados con genes reporteros. DNA utilizado en transfecciónestable contiene marcadores selectivos tales como neo o hay B, los cuales confieren resistencia a G418, un análogo de la neomicina o higromicina respectivamente. Las células transfectadas son posteriormenteseleccionadas por exposición continua al agente de selección y las clonas resistentes pueden ser aisladas. Las principales técnicas utilizadas para transfectar son:
➢ Coprecipitación con...
En el contexto de cultivo de tejido animal, el término transfección implica en cambio en el fenotipo como resultado de asimilación de nuevo material genético. Existen diversastécnicas que permiten que fragmentos de DNA previamente clonados puedan ser transferidos a células huésped, tales como coprecipitación con fosfato de calcio, la electroporación, lipotransfección y lainfección retroviral.[1]
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Por lo general el procedimiento a seguir para transfectar células de mamífero es el siguiente: El fragmento de DNA a clonar se mantiene como un plásmidobacteriano. Muchas copias de plásmidos pueden obtenerse durante el crecimiento bacteriano. El DNA plasmídico es posteriormente purificado. Una vez que la secuencia de interés ha sido clonada, esta puede sermanipulada para asilar subclonas contenientes por ejemplo de secuencias promotoras. Al realizar manipulación genética, secuencias de promotor pueden ser ligadas a genes reporteros, tales como β –gal,cuales productos pueden ser rastreados fácilmente tras la transfección. Otro ejemplo de rastreo es mediante la proteína verde fluorescente (GFP), solo aquellas células vivas transfectadas de maneraexitosa podrán ser localizadas al momento de ser irradiadas con luz UV en un microscopio invertido.
Las transfecciones pueden ser transitorias o estables. Las transfecciones transitorias son de cortoplazo y se utilizan poco después de la transfección y su la eficiencia de transfección puede ser determinada por medio de ensayos relacionados con genes reporteros. DNA utilizado en transfecciónestable contiene marcadores selectivos tales como neo o hay B, los cuales confieren resistencia a G418, un análogo de la neomicina o higromicina respectivamente. Las células transfectadas son posteriormenteseleccionadas por exposición continua al agente de selección y las clonas resistentes pueden ser aisladas. Las principales técnicas utilizadas para transfectar son:
➢ Coprecipitación con...
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