Transferencia de material genético por conjugación en Escherichia coli

Resultados.
Cruza F’ x Rec+
Tabla 1. Cuenta viable.
Cuenta viable
Dilución
Rec+
No. Colonias
Título UFC/mL
F'
No. Colonias
Título UFC/mL
1x10⁻3
942
973
999.55
1x10⁷
1072
1092
1191.40
1.19x10⁷
1x10⁻⁴
156
122


192
245


1x10⁻⁵
16


32



Tabla 2. Cuenta de revertantes.
Revertantes
Medio
F'
No. De colonias
Título UFC/mL
FRev
Rec+
No colonias
TítuloUFC/mL
FRev
G8
306
302
304
3.04x10
2.55x10⁻⁴
1
0
0.5
5
5x10⁻⁷
G9
240
282
261
2.61x10
2.19x10⁻⁴
0
0
0
0
0
G10
232
260
246
2.46x10
2.06x10⁻⁴
0
0
0
0
0

Tabla 3. Cuenta de transconjugantes.
Transconjugantes
 
1x10⁰
1x10⁻1
1x10⁻2
1x10⁻3
No. Colonias
Título UFC/mL
Título UFC/mL*
G8
NR
Incontables
1534
1558
251
358
1682.27
1.68x10⁶
1.37x10⁶
G9
189134
16
34
NR
NR
169.55
1.69x10 3
0
G10
80
91
4
6
NR
NR
82.27
8.22x10 2
0

Cruza Hfr x Rec+
Tabla 4. Cuenta viable.
Cuenta viable.
Dilución
Hfr
No de colonias
Título UFC/mL
Rec +
No. de colonias
Título UFC/mL
1x10⁻3
Incontables
660.91
6.6x10⁷
Incontables
244.29
2.44x10⁷
1x10⁻⁴
660
Error


229
248


1x10⁻⁵
67


36





Tabla 5. Transconjugantes.Transconjugantes
Medio
1x10
1x10⁻1
1x10⁻2
No. De colonias
Título UFC/mL
FRec.
G8
Error
39
6
NR
22.5
2.25x10
9.22x10⁻⁴
G9
Incontables
321
Error
10
2
277.5
2.77x10⁴
1.1x10⁻2
G10
NR
Incontables
169
198
183.5
1.83x10⁵
7.5x10⁻2

Cruza F’ x Rec-
Tabla 6. Cuenta viable.
CUENTA VIABLE
Dilución
Rec-
No. De colonias
Título UFC/mL
F'
No. De colonias
Título UFC/mL1x10⁻3
1200
1520
1400.90
1.40x10⁷
1020
1180
1067.42
1.06x10⁷
1x10⁻⁴
184
177


75
69


1x10⁻⁵
15


15



Tabla 7. Cálculo de Revertantes.
MEDIO
Rec-
No colonias.
Título UFC/mL
FRev
F'
No. Colonias
Título UFC/mL
FRev
G8
Incontables
2
2.00
20
1.42x10⁻⁶
235
243
239.00
2.39x10
2.25x10⁻⁴
G9
0
11
5.50
55
3.92x10⁻⁶
224
314
269.00
2.69x10
2.48x10⁻⁴G10
0
0
0.00
0
0
319
305
312.00
3.12x10
2.94x10⁻⁴

Tabla 8. Transconjugantes.
TRANSCONJUGANTES
 
1x10⁻1
1x10⁻2
1x10⁻3
No de colonias
Título UFC/mL
Título UFC/mL*
FRec
G8
Incontables
Incontables
Incontables
Incontables
286
366
326
3.26x10⁶
8.7x10⁵
8.2x10⁻1
G9
0
0
0
0
0
0
0
0
G10
0
0
0
0
0
0
0
0
UFC/mL* = Título descartando a las revertantesobtenidas.



Cruza Hfr x Rec-
Tabla 9. Cuenta viable.
Cuenta viable.
Dilución
Rec-
No. De colonias
Título uFC/mL
Hfr
No. Colonias
Título UFC/mL
1x10⁻3
1200
1520
1400.90
1.40x10⁷
Incontables
Incontables
680
6.8x10⁷
1x10⁻⁴
184
177


512
ND


1x10⁻⁵
15


236



Tabla 10. Cálculo de revertantes.
Revertantes
MEDIO
Rec-
No colonias.
Título UFC/mL
FRev
Hfr
Nocolonias.
Título UFC/mL
FRev
G8
Incontables
2
2.00
20
1.42x10⁻⁶
0
0
0
0
0
G9
0
11
5.50
55
3.92x10⁻⁶
0
0
0
0
0
G10
0
0
0.00
0
0
0
0
0
0
0

Tabla 11. Transconjugantes.
TRANSCONJUGANTES
 
1x10⁻1
1x10⁻2
1x10⁻3
No. Colonias
Título UFC/mL
FRec
G8
0
0
0
0
0
0
0
0
G9
0
0
0
0
0
0
0
G10
0
0
0
0
0
0
0

Tabla 12. Caracterización de las cepasutilizadas y de las cruzas obtenidas por medio del fago M13.
Cepa
Resultado
Hfr
Positivo
Rec-
Negativo
Hfr x Rec-
Negativo
Hfr x Rec+
Negativo
F’
Positivo
Rec+
Negativo
F’ x Rec+
Negativo
F’ x Rec-
Negativo


Discusión.
Como se esperaba, en la cruza F’ x Rec+ y F’ x Rec-, las transconjugantes obtenidas se iban a desarrollar en el medio G8 que es el que no poseía Histidina;dicho marcador, al estar incorporado al plásmido F de la cepa donadora (F’) se transfiere durante el proceso de conjugación dando lugar a una cepa resistente a estreptomicina y protótrofa para His, cabe mencionar que el carácter de resistencia al antibiótico lo proporciona la cepa receptora. . En dichas cruzas, no es importante que la cepa receptora sea de carácter Rec+ o Rec- ya que, como se...