Transferencias (northern,western y southern blot )

El Southern Blot es una técnica que permite la identificación de secuencias específicas de DNA, mediante el uso de electroforesis en gel y de hibridación utilizando sondas especificas.

Paraanalizar una muestra de DNA cromosomal ésta debe ser previamente fragmentada, por ejemplo utilizando sonicación ó enzimas de restricción.
Los fragmentos obtenidos se separan, de mayor a menor tamañomediante una electroforesis en gel de agarosa. Una vez terminada la electroforesis y sin teñir el gel, los fragmentos de DNA se traspasan a un filtro de nitrocelulosa ó a una membrana de nylon.
Acontinuación, el filtro se incuba con una sonda marcada, específica para la secuencia que se desea identificar. Esta sonda es una secuencia de ácido nucleico, DNAds ó RNAm, que reconocerá a lasecuencia de DNA inmovilizada en el filtro, a través del reconocimiento de secuencias complementarias de ácidos nucleicos.
El traspaso de las muestras desde el gel al filtro es una etapa esencial, porque elreconocimiento de bases complementarias entre sonda y secuencias de DNA en el gel es muy ineficiente.
Cabe señalar que el nombre de la técnica Southern Blot deriva en parte del apellido Southern delinvestigador que la desarrolló y de la palabra en inglés Blot que significa traspasar.
El Northern Blot es una técnica muy similar al Southern Blot que permite la identificación de secuenciasespecíficas de RNA.
La muestra de RNA a analizar no requiere fragmentación y se somete a electroforesis en geles de agarosa, donde las moléculas de RNA se separan desde mayor a menor tamaño.
Una vezterminada la electroforesis, y sin teñir el gel, los fragmentos se traspasan a un filtro de nitrocelulosa ó a una membrana nylon, luego el filtro se incuba con una sonda marcada, específica para lasecuencia que se desea identificar.
Esta sonda es una secuencia de ácido nucleico, por ejemplo cDNA, que reconocerá a la secuencia de RNA inmovilizada en el filtro, a través del reconocimiento de...