Transformación de e. coli con pglo

Laboratorio de Biología Molecular I
Licenciatura en Biología, Facultad de Ciencias, UNAM

Práctica no. 8
Transformación de E. coli con pGLO

Domínguez Yoalli L.
González Verdejo Elisa
Martínez Martínez Sandibel E.
Pérez Cruz Sofía K.

Gpo. 5069


Introducción:
PRACTICA 6: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA ESCHERICHIA COLI Y PROPAGACIÓN DE E. COLI TRANSFORMADA CON pGLOINTRODUCCIÓN
Escherichia coli (E. coli)
“Escherichia coli es la bacteria más constantemente encontrada en las materias fecales del hombre y de muchas especies animales. Su nicho ecológico natural es el intestino delgado y grueso, forma parte de la flora nativa interstinal y se encuentra en calidad de saprobio sin causar daño. Por el contrario, muchas cepas de E. coli producen substancias queson útiles al hospedero, como son las colicinas, que tienen efecto inhibitorio sobre otras cepas potencialmente patógenas, por lo que la colonización del intestino es benéfica para el hospedero.
E. coli es la especie dominante de la flora anaeróbica facultativa del colon humano. Las infecciones producidas por las cepas de E. coli patógenas pueden estar limitadas a mucosas o bien diseminarse.Cuatro síndromes clínicos pueden resultar de la infección por cepas patogénicas: infección de vías urinarias, sepsis, meningitis y enfermedad diarreica.
E. coli es un bacilo gramnegativo, con una sola cadena espiral de ADN, móvil, aerobio facultativo, con flagelos perítricos. La mayoría forma fimbrias y pilis, muchas cepas producen una pequeña microcápsula, y muy pocas elaboran macrocápsula, y nofabrican esporas. En las pruebas bioquímicas es positiva al indol, decarboxilasa de lisina, fermentación de manitol y gas a partir de glucosa; además es lactosa positiva en el 90% de las cepas con citrato negativo. Tienen información genética en los plásmidos, que son responsables por la producción de toxinas y la resistencia a los antimicrobianos. El genoma de E. coli contiene un total de 5,000genes.” (Cabello, R., 2007)
“Las células de E. coli son ligeramente alargadas. Su volumen es de 1 , la superficie celular de , midiendo aproximadamente 0.7 X 2.5 . En un miligramo de peso fresco hay 10 bacterias, lo que equivale a 0.3 mg de peso seco, 0.6 de agua intracelular, 0.15 mg de proteína total, 30 de DNA cromosómico. En un cultivo en división activa, cada célula tiene más de un genomas,así, los 12 de DNA corresponden a 4,000 Kb, de cuatro genomas por célula promedio.
De acuerdo a lo anterior se puede asumir como valor iniciativo aproximado que A=1.0 equivale a 0.2 mg/mL de peso seco de bacterias y A= 1.0 EQUIVALE A 0.5-0.6 mg/mL de peso fresco de bacterias.
En medio rico Luria Bertani (LB), la fase exponencial tiene un tiempo de generación de aproximadamente 30 minutos ydura hasta A=0.6-0.7. En medio LB con ampicilina, las bacterias resistentes crecen con tiempos de duplicación de aproximadamente 60 minutos.” (Ortega, G., et al, 2010)
Medios de cultivo
“Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos en un laboratorio se denomina medio de cultivo. Algunas bacterias pueden crecer bien en casi cualquier medio de cultivo; otras requierenmedios especiales y otras no pueden crecer en ninguno de los medios inertes existentes hasta ahora. Los microbios que se introducen en un medio de cultivo para que comiencen a crecer se denominan inóculo. Los microbios que crecen y se multiplican en un medio de cultivo se denominan cultivo.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes adecuados para que el microorganismo específico que se deseadesarrollar en el. También debe contener humedad suficiente, un pH ajustado de manera apropiada y una concentración conveniente de oxígeno, tal vez ausente por completo. El medio que se va a sembrar debe ser estéril, es decir, en un principio no debe contener microorganismos viables, de modo que el cultivo contenga sólo los microbios (y su descendencia) que se agreguen al medio. Por último, el...