Transformación genética

TRANSFORMACIÓN GENÉTICA MEDIANTE (Agrobacterium tumefaciens) EN UN HÍBRIDO DE PAPAYA A PARTIR DE ÁPICES IN VITRO

A

B

Figura 1. (A) Híbrido IBP 42-99 y (B) Fruto.

Figura 2. Campo depapaya afectado por el virus de la mancha anular

Fig. 4 Planta in vitro del híbrido de papaya seleccionada para la toma de los ápices .

Fig. 5 Manipulación de los Ápices (3-5 mm) antes de lainoculación con la cepa de EHA 105 .

Plásmido empleado en los experimentos de transformación
LB
T35S polyA

bar

P35S

Lac Z α

P35S

gusA-exon

Nos poly-A

RB

pCAMBIA3301 (CAMBIA;1997) de 5077 pares de bases.

gen bar (Thompson et al., 1987) regulado por el promotor 35S del Virus del Mosaico de la Coliflor (CaMV) y el terminador 35S poliadenilado del mismo virus. gen gus(Jefferson et al., 1987) regulado por el mismo promotor del gen bar y por la secuencia terminadora T-NOS poliadenilada.

12
# Puntos azules por ápices

a

10 8 6 4 2 0 2 3 4
Días de co-cultivo *Medias con letras desiguales en la misma columna difieren para p< 0.05, según Duncan
c c bc bc b

EHA 105 AT 22-60

5

6

Fig. 6. Influencia del tiempo de co-cultivo en la expresióntransitoria de la β-glucuronidasa en ápices de papaya utilizando las cepas de A.tumefaciens EHA-105 y AT 22-60.

Tabla 1. Expresión de la virulencia del Agrobacterium en diferentes niveles de temperaturasobre los ápices del híbrido de papaya.

Número de puntos por ápices Tratamientos Co-cultivo a 210C Co-cultivo a 270C ±EE 0.75 b 4.25 a 1.54

Tabla 2. Influencia del tiempo de subcultivo de lasplantas in vitro para la toma de los explantes sobre la transformación genética.

Número de puntos azules por ápices Tratamientos 1 semana de subcultivo 3 semanas de subcultivo ±EE 6.37 b 20.0 a 2.55A

B

Fig. 7 Ensayo GUS 5 días después de la infección con At. (A) Ápices transformados con la cepa EHA 105 (B) Ápices sin transformar (Control).

Plantas in vitro en medio de cultivo de...