Transg Nesis Mediada Por Espermatozoides En La Especie Porcina

Transgénesis mediada por espermatozoides en la especie porcina: efecto de la presencia de ADN exógeno sobre la calidad seminal y evaluación de la producciónin vivo de embriones transgénicos
INTRODUCCIÓN
La producción de organismos transgénicos ha sido el mayor avance en el ámbito de la biología en los últimos tiempos, siendo providencial en el estudio de mecanismos genéticos de regulación ydesarrollo biológico. Desde su inicio, allá por el año 1981 [13], se han llevado a cabo numerosas mejoras en la tecnología de la transgénesis, siendo diversos los sistemas de transferencia de ADN que se realizan hoy en día, con una gran eficiencia y con un coste reducido, en especial en la especie murina (Mus musculus). Desde hace casi dos décadas, el uso de los espermatozoides como vectores de ADNexógeno (transgénesis mediada por espermatozoides: SMGT) ha centrado la atención de numerosos investigadores en un continuo debate sobre la transgénesis animal [25]. En 1989 se demostró la capacidad que tenían los espermatozoides de ratón, de transportar ADN exógeno y transferir estas moléculas al interior del ovocito en el proceso de la fecundación, dando lugar a animales modificados genéticamente[21]. De tal manera, la transgénesis mediada por espermatozoides, debido a su relativa sencillez y bajo costo, podría ser ampliamente utilizada para la producción de animales de granja modificados genéticamente, representando una potente herramienta para la biomedicina. Dicha metodología mejora notablemente la eficiencia que se alcanza al emplear la microinyección pronuclear (0,5-4% de eficiencia)[24], ya que se han obtenido resultados muy esperanzadores próximos a un 80% de animales transgénicos obtenidos [25].
Sin embargo, las dificultades en la repetitividad y la baja eficiencia en la integración de los transgenes en el genoma del animal obtenida con esta tecnología, resultó en una considerable controversia sobre dicho trabajo durante numerosos años [3, 4]. No obstante, son varios losestudios que han sido publicados recientemente en los que se confirma que, los espermatozoides de múltiples especies pueden ser usados como vectores para introducir transgenes dentro del genoma del animal [25].
En la especie porcina (Sus scrofa) doméstica, se ha utilizado con éxito esta técnica para producir cerdos transgénicos mediante el uso de la inseminación artificial (IA) [20, 25], o medianteel uso de transferencia de embriones producidos mediante la inyección intracitoplásmica de espermatozoides (ICSI) [25]. La aplicación de IA intrauterina permite el uso de un número reducido de espermatozoides [9] al depositar los espermatozoides próximos al lugar de fecundación y evitar el proceso de transporte espermático que se produce a través del tracto reproductor femenino cuando se realizauna IA convencional. La calidad seminal de la muestra determina la capacidad de fecundar los ovocitos y producir embriones viables, por tanto es necesario asegurar, como paso previo, que la incubación de los espermatozoides en presencia de ADN no afecte sustancialmente la calidad seminal.
De acuerdo a lo anteriormente descrito, los objetivos de este trabajo fueron: en primer lugar, evaluar elefecto de la presencia del ADN exógeno sobre la calidad seminal; y en segundo lugar, evaluar la producción in vivo de embriones transgénicos mediante la inseminación intrauterina quirúrgica con espermatozoides incubados con el ADN exógeno.
MATERIALES Y MÉTODOS
Animales
El semen utilizado procedió de verracos de fertilidad probada perteneciente al centro de inseminación artificial de la granja “LoNavarro S.A.” (Murcia, España). Los animales estuvieron alojados en habitáculos individuales mantenidos a temperatura controlada (25°C) y bajo condiciones naturales de luz y humedad.
Para las inseminaciones quirúrgicas fueron utilizadas 4 hembras prepúberes, todas ellas Landrace X Large White. Fueron alojadas en jaulas individuales o en parques, con una ración de comida diaria y agua ad libitum,...