transgenico

En este trabajo se desea evaluar cómo afecta el gen FaPG1 en el ablandamiento de la frutilla.
El objetivo principal es el silenciamiento génico de FaPG1 en Fragaria x ananassa para evitar elablandamiento en la maduración utilizando la técnica ARN-antisentido.
Metodología
Se obtuvo el gen FaPG1 de la frutilla Fragaria x ananassa, se procede a buscar la secuencia del gen en una la base dedatos NBCI, y se manda a hacer sus partidores específicos, se extrajo ARNm mediante una matriz de oligodT, el ARNm se pasó a ADNc mediante la transcriptasa reversa y con los partidores específicos através de PCR se obtuvo la región codificante del gen FaPG1.
Método de transformación
Como vector de clonación se utilizó el plásmido pGUSINT.(Vancanneyt et al., 1990). El gen FaPG1 se digirió conenzimas de restricción liberando el gen gus y se clono en la orientación antisentido del plásmido, utilizando como promotor el CAMV 35 S y terminador NOS. Se confirmó mediante análisis de restricciónla presencia del inserto FaPG1 en orientación antisentido.
Este plásmido binario que contiene el fragmento del gen Fapg1 en orientación antisentido fue insertado en A. tumefaciens medianteelectroporación.
Transformación de plantas
Se utilizó discos de hoja de frutilla Fragaria x ananassa en vitro además se adicionó acetoseringona para estimular y activar a la región de virulencia y asíAgrobacterium comenzara a transformar la planta.
Medios selectivos
En esta etapa se necesita tener controles negativos, plantas transformadas y no transformadas por Agrobacterium tumefaciens, en unmedio selectivo con kanamicina, en la cual sobrevivieron aquellos solo que fueron transformadas.

Análisis moleculares
Se utilizó Southern blot se observó el gen que codifica para ARN antisentidodel gen FaPG1 tiene dos copias en el genoma de la frutilla, con múltiples análisis de PCR se verifico que solamente los genes de interés fueron insertados y ningún sector de ADN bacteriano fue...