Transporte De Glucosa En Levaduras

“REPORTE- PRACTICA 1”
TRANSPORTE DE GLUCOSA EN LEVADURAS

Equipo:7

Grupo: 6QV1 Sección: 2

Fecha de entrega: 23 de Agosto del 2011
Objetivos

Concluir cual es el mecanismo de transporte que la levadura utiliza para incorporar la glucosa utilizando inhibidores de transporte.
Observar el efecto de la temperatura sobre el transporte de glucosa.
Hipótesis

Si el transportede glucosa en la levadura es activo entonces se inhibirá con 2,4-dinitrofenol(DNF), si es difusión facilitada se inhibirá con N-etil maleimida pero no con DNF
A menor temperatura menor transporte de glucosa.
Diseño Experimental

Técnica de cuantificación de azucares reductores utilizando DNS (acido 3,5-dinitrosalicilico), esta técnica se basa en la reducción del DNS (color amarillo) por laglucosa u otro azúcar reductor al 3-amino-5-nitrosalicilico ( de color rojo ladrillo), cuya presencia se detecta por la lectura de absorbencia en la zona de 540-570nm.

Sin embargo cabe destacar que se debe de realizar previamente a la determinación de azucares reductores, una curva tipo. Según la ley de Lambert y Beer, la absorbencia es directamente proporcional a la concentración del materialque absorbe la luz, por lo cual sabiendo que esta es una relación aproximadamente lineal, se prepara una solución estándar, con una concentración conocida de glucosa y se hacen diversas diluciones de la misma, para poder obtener dicha relación y expresarla matemáticamente con la ayuda de la ecuación de la recta y=mx+b, donde x será la concentración del analito , y la absorbencia observada por cadaconcentración, m la pendiente y por ultimo b la ordenada al origen.

Tabla 1 .-Lista de reactivos utilizados en la práctica y función de los mismos.

Reactivo Función
Solución de glucosa de 4 mg/ml Analito a estudiar en el transporte del mismo en levadura
2,4 dinitrofenol (DNF) 2nM Inhibidor de transporte Activo debido a que causa interferencias con la fosforilación oxidativa o con lafosforilación por desacoplamiento, evitando la síntesis de ATP, además por tener un protón disociable, se ve disipado el gradiente de protones por lo que inhibe al transporte activo.
N-etil maleimida (NEM) 4mM Inhibidor de transporte mediado por proteinas debido a que este compuesto se pega a los grupos sulfidrilo, orientados hacia afuera de la membrana citoplasmática, así este se pega en el ladoextremo de la proteína en un grupo –SH, y se bloquea el transporte.
NaOH 0.5N Este hidróxido tiene como función detener el transporte de glucosa en levadura, debido a que cambia el pH, desnaturalizando a su vez a las proteínas en la membrana citoplasmática impidiendo que cumplan su función.
Glucosa 500μg/ml Este reactivo fue utilizado para realizar la curva tipo necesaria para la determinación deazucares reductores (glucosa) con la técnica de DNS, de esta concentración inicial se realizaron diluciones para obtener la absorbancia a las diferentes concentraciones y así obtener una ecuación de la recta. De las absorbancia obtenidas en los diferentes casos a estudiar se obtendrá la concentración de glucosa residual con la ecuación de la recta previamente mencionada

Registro de Datos
Tabla 2.-Datos de la curva tipo de Glucosa
µg de Glucosa Absorbencia (540nm)
0 0
100 0.174
200 0.429
300 0.710
400 0.928
500 1.117
Tabla 3 .-Determinación de glucosa residual
Absorbencia (540nm)
Matraz No. 0 min. 10 min. 20 min. 30 min.
1 0.661 0.988 0.970 0.966
2 0.472 0.429 0.012 0.007
3 0.660 0.766 0.531 0.336
4 0.723 0.987 0.983 0.897
5 0.004 0.006 0.008 0.009

Tabla 4 .- mg deglucosa residual y consumida /ml

Matraz
No. Residual (mg/ml) Consumida (mg/ml)
0’ 10’ 20’ 30’ 0’ 10’ 20’ 30’
1 2.1423 2.1347 2.0913 2.0804 0 0.0076 0.0510 0.06195
2 1.5260 0.9195 0.0086 0 0 0.6065 1.5173 2
3 2.1391 1.6521 1.1369 0.7108 0 0.4869 1.0021 1.4282
4 2.3445 2.1326 2.1195 1.9304 0 0.2119 0.2250 0.4141
5 0 0 0 0 0 0 0 0

Manejo de Datos



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