transporte del farmaco

bkcfjDETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE ACIDO PIRUVICO EN LA SANGRE POR EL METODO DE JHONSON

Fundamento: El método está basado en la determinación de formación del purivato en el transcurso de laoxidación del lactato con la participación de la enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH) del suero sanguíneo.

El piruvato con 2,4 dinitrohenilhidrazina forma la correspondiente hidracina, que tiene uncolor pardo rojizo en medio alcalino. Cuya intensidad de color es directamente proporcional al contenido del cetoacido.

Objetivo: Determinar en forma cualitativa la presencia de ácido pirúvico ensangre.
Reactivos: Ácido tricioroacético al 5 %, 2,4 dinitrofenilhidrazinal al 0,1 % en HCI, solución hidróxido de sodio solución al 8 %, solución ácido sulfúrico 0,1 %, solución patrón concentrada deácido pirúvico de 10 mg por 100 ml, solución diluida de ácido pirúvico de 0.6 mg por 100 ml.

Instrumental: jeringa y aguja hipodérmica. Pipetas de 1; 5 y 10 ml, tubosde centrifuga, centrifuga,espectrofotómetro, cubetas de cuarzo.
Material: Sangre venosa
Curso de la determinación: Echar en entubo de centrifuga 1ml de sangre venosa que contenga 4,5 ml de solución de ácido tricloroacético, mezclarpor agitación y centrifugar por 15 min. A 3000 r.p.m.
Disponga de 3 tubos de ensayo tal como se indica en la tabla:

Reactivos
Problema
Blanco
Patron
Sobrenadante destproteinizado
3 ml
0000
Ácido tricloroacético 5 %
00
3 ml
00
Solución patrón diluida de ac pirúvico
00
00
1,5 ml
Agua destilada
00
00
0,75 ml
Solución de ácido sulfúrico 0,1 N
3 ml
3 ml
1,50 ml
Reactivo de2,4 DFH
0,2
0,25
0,25 ml
Mezclar pos agitación reposar en oscuridad por 15 minutos



Solución de hidróxido de Sodio al 8 %
2,50
5 ml
5 ml
Agua destilada
1 ml
1 ml
00
Leer en elEspectrofotometro a 540 nm




Cálculos:
Se aplica la formula mg de ácido pirúvico en 100 ml sangre

Nota: para la preparación de la solución patrón diluida preparese por dilución del patrón...