Tratamiento De Aguas

CURSO

DE

CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS

HPLC



CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS HPLC

1.- INTRODUCCIÓN

La cromatografía se utiliza para separar los diferentes analitos de interés a partir de mezclas con otros analitos que interfieren. Los métodos cromatográficos se pueden dividir en dos principales categorías: cromatografíade gases (GC) y cromatografía de líquidos de alto desempeño (HPLC).

La cromatografía de líquidos de alto desempeño (HPLC) es una técnica de separación muy usual para semivolátiles y no volátiles o para analitos que se descompongan por calentamiento. El éxito de la separación de cromatografía de líquidos requiere que los analitos de interés sean solubles en el disolvente seleccionado comofase móvil. Debido a que los disolventes se trabajan a alta presión, la técnica originalmente se le llamó cromatografía de alta presión, pero ahora se le refiere como cromatografía de líquidos de alto desempeño, (High Performance Liquid Chromatography).

Todos los procesos alcanzan una separación por el paso de una fase móvil sobre una fase estacionaria. Los constituyentes de una mezcla sonseparados debidos a sus diferentes coeficientes de partición entre la fase móvil y la fase estacionaria teniendo así diferentes tiempos de retención. Los compuestos que interaccionan fuertemente con la fase estacionaria eluyen lentamente (tiempo de retención grande), los compuestos que permanecen en la fase móvil o que su interacción con la fase estacionaria es débil, eluyen rápidamente (tiempo deretención corto).

2.0 DEFINICIONES

2.1 Tiempo de retención total ( tR1 o tR2 ) es el tiempo, que es necesario para que el componente de una muestra migre desde la entrada de la columna (inyección de la muestra) al final de la columna(detector).
Tiempo muerto t0 (tiempo sin adsorción) es el tiempo requerido por un compuesto inerte para que migre de la entrada de la columna al finalde la columna sin ninguna interacción por la fase estacionaria.

2.2 Tiempo de retención neto o corregido (t´R1 o t´R2) es la diferencia entre el tiempo de retención total y el tiempo muerto t0 . Que es el tiempo que permanece el analito en la fase estacionaria.
t´R1 = tR1 – t0 t´R2 = tR2 - t0

2.3 Factor de capacidad k´es una medida de la separaciónde la muestra en el cromatograma. Este es específico para una sustancia dada, k´ depende de la fase estacionaria, la fase móvil, la temperatura, características del empaque, etc.
k1´= tR1 – t0 = tR1 k1´= tR1 – t0 = tR1
t0 t0 t0 t0


2.4 Retención relativa ,también conocido como factor de separación , es la relación entre dos factores de capacidad, colocándose en denominador el compuesto de referencia.

= k´2
k´1

2.5 Velocidad lineal del disolvente µ (cm/seg). La velocidad lineal es independiente de la sección transversal de la columna y proporcional a la caída de presión de la columna.La velocidad lineal puede ser calculada por medio del tiempo muerto, en donde L es la longitud de la columna en cm y t0 es el tiempo de retención de un compuesto no retenido.

U = L
t0
2.6 Número de platos teóricos n caracteriza la calidad del empaque de una columna y su transferencia de masa, números grandes de n significa que se pueden separarmezclas complejas de analitos.

N = 16 ( tR1 / w ) 2 = 5.54 (tR1 / w1 )2
2

2.7 Altura equivalente de un plato teórico h (HETP), es la longitud (o altura) de un plato teórico, cuando una columna tiene un número grande de platos teóricos, h , la altura deberá ser muy pequeña. El valor de h es un criterio...