Tuberculosis bovina

m E R c u L o s I S Y MYCOBACTERIUM
BOVIS POR PCR EN TIEMPO REAL

L a tuberculosis es una zoonosis
c a u s a d a por M y c o b a c t e r i u m
tuberculosis y M ycobacterium
b o v i s , m icobacterias pertenecientes al Complejo M ycobacterium tuberculosis ( C M T ) ,
j unto con M . africanum y M .
m icroti. E stos microorganismos
muestran una g ran h omogeneidad en la secuencia de nucleótid os a pesar de sus variaciones
e n c u a n t o a poder patógeno,
epidemiología y c aracterísticas
fisiológicas. M . bovis es el
agente causante de la tuberculosis bovina, y puede afectar a
animales tanto salvajes como
domésticos, y en menor porcentaje al hombre. La tuberculosis causada por M . bovis e s
una de las enfermedades inclui d as en las Campañas de Saneamiento Ganadero y una delas
zoonosis sometidas a vigilancia
obligatoria. Por ello, sería inte r esante disponer de una técnica
que permitiese distinguir entre
microorganismos tan estrecha -

m ente relacionados como M .
bovis y M . tuberculosis. D ebido
a esta razón, hemos validado en
nuestro laboratorio, la técnica
descrita en el protocolo " Identificación d e M . b o v i s y M .
tuberculosis m ediante PCR entiempo real" d e Bio-Rad Laboratorios, que nos permite hacer
esa diferenciación.

sos elementos genéticos móvi les presentes en el género
M ycobacterium. E n investiga c iones realizadas por Gordon y
col. (1999) y Huard y col.
( 2003), l a amplificación para el
fragmento IS 156 1 fue positiva
para todas las cepas que testaron, a excepción de las pertenecientes a M . microti.

Existenuna gran variedad de
marcadores para la identificación génica de M . bovis y M .
tuberculosis. E n el desarrollo
de este estudio, e l protocolo
que hemos seguido considera
dos: la secuencia de inserción
IS1561 y el gen Rv1510.
S egún los trabajos realizados
por diversos autores, la combi n ación de estos dos marcadores
permitirían distinguir M. b ovis
d e M . tuberculosis - M. a frican u m( estos dos m icroorganism os presentan una similitud de
secuencia superior al 9 9,95%).

S egún los estudios realizados
por Huard y col. ( 2003), l os
primers generados en e l gen
R v15 1 0 situados en e l locus
RD4 podrían distinguir M .
bovis y M . bovis B CG d el resto
d e subespecies del CMT, ya
que no apreciaron amplificaciones para este gen en
las cepas de M . b o v i s y M .
bo v i s BCG, y sí observaron
amplificaciones en otras cepas
de micobacterias pertenecientes al CMT.

La secuencia de inserción
IS 1561 es uno de los numero-

El presente trabajo se divide en
dos partes:

3512006 Laboratorio Veterinario Avedila

en los que se observaron bacilos ácido-alcohol resistentes se
procesaron mediante la PCR
convencional. Para ello, la
extracción de losácidos nucleicos se realizó mediante column as c on un k i t c omercial
(Nucleospin Tissue Kit, Macher ey-Nagel), con una digestión
previa de 18 horas con lisozima
(Sigma - Aldrich). El ADN
extraído se amplificó mediante
PCR ( " Diagnóstico de M icob acterias por PCR convencio nal" - Cultek, S L) y se clasificaron como positivos a CMT,
otras micobacterias y negativos.
Figura 1 .- Muestra deganglios y pulmón con lesiones compatibles con Tuberculosis

Primera parte: Se amplifica
p or PCR en tiempo real un
marcador g enético d e micobacterias, el IS 156 1. En este
primer paso se consideraron
tres grupos de muestras:
-

-

-

muestras de cultivo puro de
M. bovis, M. tuberculosis y
M . avium;
muestras clasificadas
como pertenecientes al
CMT;
muestras negativas.

Segundaparte: Se amplifica el
gen Rv1510. En este grupo se
tienen en cuenta los siguientes
tipos de muestras:

Una vez clasificadas las muestras
y para ambos marcadores hemos
seguido el protocolo para la
"Identificación de Mycobacterium
tuberculosis y M ycobacterium
bovis mediante PCR en tiempo
real " de Bio-Rad Laboratorios.

- d e cultivo puro de M.
bovis, M . tuberculosis;
-...