Turbidimetria Y Nefelometria

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA

CONSULTA: “DENSIDAD OPTICA (ABSORBANCIA) Y TURBIDIMETRIA PARA CUANTIFICACIÓN DE BIOMASA”

Métodos turbidimétricos (ópticos). 
Son métodos indirectos de medición demasa celular. La base común de estos métodos consiste en la medición de la cantidad de luz dispersada o transmitida a través de un cultivo bacteriano.
Las suspensiones bacterianas dispersan la luz,al igual que cualquier partícula pequeña suspendida en agua (efecto Tyndall). La dispersión de la luz es, dentro de ciertos límites, proporcional a la masa del cultivo.

a) Espectrofotómetro: Midela densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia (una medida de la luz transmitida a través de la suspensión).
* Hay que realizar una curva estándar para relacionar los valores de A con la masabacteriana en una muestra problema.
* La cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamaño de la partícula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la técnicaaumenta pues a longitudes de onda (l) cortas. La proporcionalidad entre A y masa bacteriana sólo es válida para >107céls/ml.

b) Nefelómetro: mide la luz dispersada por una solución de partículas.Posee mayor sensibilidad que el espectrofotómetro

Las fases de crecimiento de una población bacteriana pueden determinarse midiendo la turbidez del cultivo. Aunque dicha turbidez no es una medidadirecta del número de células, su incremento es una indicación del crecimiento bacteriano.
El cambio de luz se registra en el espectrofotómetro como porcentaje de transmisión (cantidad de luztransmitida) y absorbancia o densidad óptica (D.O.), valor derivado del porcentaje de transmisión, correspondiente al log del cociente entre la intensidad de luz incidente sobre la suspensión (Io) y la de laluz transmitida por la suspensión
A = log Io/I

Turbidimetría: La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual...