TÉCNICA DE DISOCIACIÓN DE ANTICUERPOS
Identificar y localizar Ag en el interior o
superficie de la célula
Fluoresceina fijado a una molécula de Ac
Métodos directos e indirectos
Actualmente :CMF:cuantificar hemorragia
maternofetal,identificar cél transfundidas y
seguimiento de la supervivencia
ENZIMOINMUNOANÁLISIS
Medir Ag o Ac
Fosfatasa alcalina puede unirse a moleculas
de Ac sin destruirsu especificidad
Utilizada para unir Ig unida a GR y demostrar
hemorragia fetomaterna
PRUEBA DE ADHERENCIA DE
GR
EN
FASE
SÓLIDA
PRUEBA DIRECTA:
Ac fijado a la microplaca y se agregan GR
(+) GR se adhieren a los bordes
(-) GR se asientan en los bordes
PRUEBA INDIRECTA
GR con Ag conocido unidos a una placa pretratada con
glutaraldehido y poli-lisina, Ac especifico
Se agrega suero ,incubar,lavar proteinas remanentes
Indicador para el Ac fijado GR recubiertos con IG
Interpretación : Idem
PRUEBA DE ADHERENCIA DE
GR EN FASE SÓLIDA
PRUEBA DE GEL
Utiliza microtubos contenidos en una tarjeta de
gel.Este formato permite la centrifugación
simultánea de los tubos(6) en equipos
especialmente diseñados
La incubación del Ac con los GR ensuspención se
realiza en la parte superior del tubo ,luego se
centrifuga para que los GR entren en contacto con
el As que baña el gel
Los geles actúan como filtro,reteniendo los
aglutinados y dejando pasar los GR libres que se
depositan en el fondo
EXISTEN 3 FORMULACIONES BÁSICAS
DEL GEL
Gel neutro:
Solo contiene la matriz del gel-sephadex
para detección deaglutinados producidos porAc aglutinantes
Prueba inversa ABO,investigación de Ac frios y
pruebas enzimáticas
Gel especifico:
Mezcla de gel-sephadex contra un Ag de
gr sanguineo
Determinación de Gr sanguineo
Gel antiglobulina:
Se usa en la P de Coombs para identificar
Ac antieritrocitarios incapaces de producir
aglutinación directa
Puede ser utilizado para detectar e identificar
Ags yAc,pruebas de compatibilidad
pretransfusional
En los tubos que contiene el panel ABO,el gel
está en medio salino,mientras que en los del
panel selector está en reactivo de Coombs
VENTAJAS:
Puede efectuarse técnicas en ½ salino,
enzimático,antiglobulinico
Es automatizable
DESVENTAJAS:
Costo y equipamiento
Partículas de gel :filtros que atrapan los
aglutinados
Aglutinadosgrandes:Parte superior
Aglutinados pequeños: Parte Inferior
No aglutinados :extremos en pico
APLICACIONES:
Detectar e identificar Ac o Ag
Pruebas de compatibilidad
Prueba Funcional: ERITROFAGOCITOSIS
En 3 portaobjetos colocar 1,5 ml. de sangre del
paciente recién extraída e incubar durante 60
minutos a 37C en cámara húmeda. Retirar el coágulo
formado y lavar las células obtenidas por sucapacidad de adherirse al vidrio con una solución de
Hanks a 37C.
Preparar las siguientes suspensiones al 5% en
solución fisiológica:
a) Hematíes Propios (HP)
b) Hematíes Normales (HN)
d) Hematíes Normales Sensibilizados (HNS) con anti-D
(clase IgG) diluido convenientemente.
A 2,5 ml de las mismas agregar 1 ml de suero
humano fresco compatible y 1,5 ml de solución de
Hanks.
Incubarlos portaobjetos con 1 ml de cada
una de estas mezclas durante 3 hs. a 37C en
cámara húmeda. Posteriormente lavar con
solución de Hanks a 37C.
Fijar las células mononucleares obtenidas
con metanol durante 1 minuto y colorear con la
tinción de May Grunwald Giemsa.
Realizar la observación microscópica de los
preparados contando 200 elementos y calcular los
porcentajes de célulasfagocíticas activas (CFA).
Imágenes de
eritrofagocitosis
CF
A
GRs
adheridos
GR
fagocitado
-INHIBICIÒN DE LA HEMAGLUTINACIÒN:
Neutraliza un Ac especìfico con su sustancia soluble
correspondiente en las pruebas de identificaciòn de Ac
( ùtil cuando se trabaja con muestras sèricas que
contienen mùltiples especificidades)
TRATAMIENTO ENZIMÀTICO:
Se utilizan para tratar Gr...
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