Técnica De Microplaca Para Cuantificar Los Nutrientes

Una técnica de microplaca para cuantificar los nutrientes (NO2?, NO3?, NH41 y PO4 3?) En agua de mar
introducción
Varios métodos para medir nitrato en agua de mar se basan en la reducción de nitrato y la posterior colorimétrico cación ¢ cuanti del total de nitrito (Wood, Armstrong y Richards 1967). Reducción de nitrato es e / cientemente realizado ( 495 % de precisión ) pasando la muestra através de una columna que contiene cadmio recubierto con cobre . Este procedimiento está libre de interferencias y capaz de medir concentraciones nanomolares de nitrato en el agua de mar ( Oudot y Montel 1988 ; Raimbault , Slawyk , Coste y Fry1990 ) . El procedimiento se utiliza actualmente en el muestreo del agua para estudios oceanográficos ( Strickland y Parsons 1972 ; Tre ¤ guer y Le Corre 1975 ;Grasshof 1976 ; Aminot y Chaussepied1983 ) .
Todos los métodos utilizados para la determinación de nitrito en el agua de mar se basan en la formación de ¢ especí co de color complejos . La mayoría de ellas implican la conversión de nitrito en ácido nitroso ( HNO2 ) que diazotizes sulfanilamida . Sal sulfanilamida - diazonio reacciona con N - ( 1 - naftil) - etilendiamina estequiométricamente ,produciendo un cromóforo que se mide a 540 nm ( Bendschneider y Robinson1952 ) .
La mayoría de fósforo inorgánico en el agua de mar está presente iones como ortofosfato ( principalmente HPO4 2 ? y PO4 3 ? ) . Un excelente método para cuantificar inorgánico fósforo fue descrito por Murphy y Riley ( 1962 ) , basado en la formación de un fosfo – molibdato compleja por la interacción entre amoniomolibdato y ortofosfato en presencia de de antimonio . Este complejo se reduce con ascórbico ácido , formando un compuesto de color azul con un lmax en 885 nm . Inthiswork , se presenta la adaptación de la microplaca sistema para el nitrito , nitrato , amonio , y determinación de fosfatos , que es altamente susceptible para los análisis precisos y exactos de múltiples muestras. Estos métodos se puedenutilizar para la monitorización de rutina en instalaciones de acuicultura .
Materiales y métodos
Todos los productos químicos fueron adquiridos de Sigma Chemical (St Louis, MO, EE.UU.) y las soluciones se prepararon usando agua desionizada. La densidad óptica fue grabado usando un lector de microplacas (modelo 550, BioRad , Hercules, CA , EE.UU. ) o un espectrofotómetro (Lambda Bio 20 , Perkin Elmer^ , Wellesley, MA, EE.UU. ) . Una microplaca de 96 pocillos con una capacidad de 300 ml en cada uno así se utilizó . Todo el volumen y los tiempos de incubación indicado fueron seleccionados para cada método después de los ensayos en este trabajo.
las determinaciones químicas
El nitrito y amonio se determinaron después de el método propuesto por Strickland y Parsons ( 1972 ) , mientras nitrato yfosfato se midieron utilizando las técnicas propuestas por Wood et al. ( 1967 ) y Murphy y Riley ( 1962 ), respectivamente. Para estas muestras , a 1 cm espectrofotómetro celular vía era utilizado . La miniaturización de estos métodos se llevó a cabo utilizando una microplaca de 96 pocillos , y la absorbancia fue medido en lector microplaca en lugar de un espectrofotómetro.
determinación denitrito
Las muestras (250 ml) se colocaron en una microplaca de 96 pocillos y with10 mixta ml solución de1 sulphanilamide % en HCl 3 N y se incubaron durante 5 min a la habitación temperatura . Entonces , 10 ml de 0,1 % de N- ( 1 - naftil) - y se añadió etilendiamina se incubaron durante 10 min a temperatura ambiente . Finalmente , absorbancia se midió a 550 nm en una microplaca lector. La soluciónestándar de nitrito ( 5 mM ) se preparó por disolución de 34.5mg de NaNO2 en agua desionizada 100 ml agua y el uso de esta solución para preparar un curva estándar ( 0.78 ^ 50 mM ) . la determinación de nitrato Cadmio en polvo se lavó dos veces con agua desionizada agua , HCl 0,1 N y 0,1 M de NH4Cl ( pH 9,6 ) . activado cadmio fue almacenan en 0,1 M de NH4Cl ( pH 9,6 ) a 10 1C hasta su uso . Para...