Técnica de Tinción Histológica "De Rutina"

(5.2.1.) Técnica Histológica “de rutina” para células y tejidos

“El corte de rutina teñido con hematoxilina y eosina es la muestra que más se estudia.” (Ross & Pawlina, 2012)

Obtención de lamuestra.- Se puede observar un tejido por post-mortem (autopsia), in vivo (biopsia) u obtener células o fluidos por medio de una punción.
Fijación.- Una vez que se tiene la muestra a observar, esimprescindible que se coloque inmediatamente en un fijador para conservar la estructura original; éste sirve para: abolir el metabolismo celular, impedir la autodigestión, eliminar patógenos (bacterias,virus u otros hongos) y endurecer el tejido. El fijador de uso más común es la formalina; sustancia acuosa de formaldehído (conserva muy bien la estructura celular, pero no reacciona con lípidos, porlo tanto es un mal fijador de membranas).
Inclusión (deshidratación, aclaración e inclusión).- El siguiente paso es infiltrar la muestra dentro de un medio de inclusión para poder realizar cortes muydelgados. Posteriormente, la muestra se lava y se deshidrata en alcohol. Se aclara la muestra con solventes orgánicos que se pueden mezclar con parafina para extraerle el alcohol de 100% (antes de lainfiltración con parafina disuelta).
Corte.- Cuando la parafina se endurece, se pasa a una máquina de cuchillas (micrótomo) que cortará finamente la muestra (6-10µm).
Montaje preliminar.- Mástarde, ésta se adhiere al portaobjetos con albúmina.
Coloración (Aclaración, rehidratación y tinción).- La muestra ha quedado delgada e incolora (debido a la parafina), pero así no puede ser observadatodavía; se debe disolver la parafina (de nuevo con los solventes orgánicos: xileno o tolueno) y rehidratar la muestra (mediante alcoholes de concentración decreciente).
La muestra que está adherida alportaobjetos se tiñe con hematoxilina; pero para colocarle un colorante de contraste, se debe deshidratar, nuevamente con soluciones alcohólicas de concentración creciente. La hematoxilina colorea...