Técnica del PCR






PCR
(Reacción en cadena de la polimerasa)














Introducción

En el siguiente trabajo de investigación se desarrollará el concepto de PCR (Polymerase Chain Reaction, en inglés) que se define como una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener múltiples copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de unmínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usosderivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica conocida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
Inicialmente, la técnica era muy lenta, debido a que las polimerasas, uno de los reactantes de la PCR, se desnaturalizaban al realizar cambios de temperatura, lo que obligaba a agregar nuevas polimerasas, lo que ralentizaba el proceso. Hoyen día, todo el proceso de la PCR está automatizado mediante un aparato llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de reacción para controlar la temperatura necesaria para cada etapa de la reacción. Muchos termocicladores modernos hacen uso del efecto Peltier, que permite tanto calentar como enfriar los tubos simplemente invirtiendo la corriente eléctrica. Los tubos usadospara PCR tienen una pared muy fina, lo que favorece una buena conductividad térmica.








Abstract
Español
PCR (Reacción en cadena de la polimerasa): técnica de biología molecular que permite obtener múltiples fragmentos de ADN a partir de una muestra. Fue desarrollado por Kary Mullis en 1986 y requiere de los siguientes reactivos: desoxirribonucleósidos trifosfatados, dos cebadores deADN, iones divalentes (Mg2+ o Mn2+), iones monovalentes, como el potasio, una solución tampón, enzima ADN polimerasa, ADN molde, termorregulador.
Etapas:
Desnaturalización: separación la doble hebra de ADN.
Apareamientos: Coloca los cebadores de ADN en los extremos de la cadena molde.
Polimerización: Rellena los espacios que no tienes cebador con desoxirribonucleósidos trifosfatados debido ala acción de la ADN polimerasa.

Técnicas:

PCR anidada: los cebadores se unen al amplicón inicial, lo que genera alta especificidad, pero no permite cuantificar la muestra obtenida.
PCR in situ: se realiza al interior de la célula, aprovechando sus sistemas de corrección de errores.
PCR múltiple: se amplifican varias secuencias de ADN simultáneamente, lo que permite ubicar los locus delos genes.
PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR): se realiza el proceso a partir de ARN.
PCR en tiempo real o PCR cuantitativo (qPCR): permite cuantificar la cantidad de ADN o ARN presente en la muestra original.




Aplicaciones:
En medicina se utiliza para distintos tipos de diagnósticos; en la paleontología permite recuperar las moléculas de ADN que quedan en fósiles; en estudioforense se utiliza para la investigación de distintos restos y así identificar de quién provienen, entre otras aplicaciones.
Ventajas:
La rapidez y sencillez de su uso.
Alta sensibilidad, haciendo referencia a que se puede realizar desde una pequeña cantidad de ADN.
Robustez, lo que permite sintetizar copias desde un ADN muy degradado.
Desventajas:
Necesidad de disponer de información sobre lasecuencia del ADN diana.
Tamaño corto de los productos.
Infidelidad en la PCR in vitro, lo que significa que se pueden producir errores en la copia, y peligro de contaminación con otras sustancias.

Inglés
PCR (reaction polymerase chain): technique molecular biology that allows for multiple DNA fragments from a sample. It was developed in 1986 by Kary Mullis and requires the following...